含色氨酸残基的肽的合成方法

摘要

本发明公开了一种固相合成含有至少一个色氨酸残基的肽的方法，其中所述方法包含用对碱不稳定的侧链保护基团暂时性保护所述色氨酸残基的吲哚环，其中所述保护基团在所述肽从固相支持物上切割过程中被去除。

主权项

1.一种制备具有通式(I)的肽的方法，A1-A2-A3-Ser-A5-D-Trp-Leu-A8-Pro-A10-R1 (I)其中A1是对谷氨酸或N-Ac-D-β-Nal；A2是组氨酸、D-p-Cl-Phe或D-p-F-Phe；A3是色氨酸或D-色氨酸；A5是酪氨酸、NicLys、cPzACAla或PicLys；A8是精氨酸、hArg(Et)2、hArg(Bu)、hArg(CH2CF3)2或Lys(iPr)；A10是甘氨酸、D-丙氨酸或缺失的；和R1是NH2或NHEt；其包含以下步骤：(a)如果A10存在，就将Boc-A10的铯盐，或者如果A10不存在，就将Boc-Pro的铯盐连接在氯甲基化的聚苯乙烯树脂上以分别产生Boc-A10-树脂或Boc-Pro-树脂；(b)通过使Boc-A10-树脂或Boc-Pro-树脂与Boc去封闭的有机酸混合分别产生H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂的有机酸盐而将Boc-A10-树脂或Boc-Pro-树脂去封闭；(c)将H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂的有机酸盐与碱中和分别产生H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂；(d)以从C端到N端的顺序，将H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂与Boc-α-胺保护的氨基酸偶联，所述保护的氨基酸对应于通式(I)中所限定的氨基酸，其包括：(i)将H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂与Boc-α-胺保护的氨基酸在肽偶合剂的存在下反应产生Boc封闭的偶联产物；(ii)通过将Boc封闭的偶联产物和Boc去封闭的有机酸混合，从Boc封闭的偶联产物中去封闭Boc基团，生成偶联产物；(iii)将偶联产物和下一个Boc-α-胺保护的氨基酸在肽偶合剂的存在下反应产生Boc封闭的偶联产物；(iv)通过将Boc封闭的偶联产物和Boc去封闭的有机酸混合，从Boc封闭的偶联产物中去封闭Boc基团，生成下一个偶联产物；(v)重复步骤(d)(iii)和(d)(iv)直到通式(I)的肽的N端氨基酸偶联完毕，以及N端氨基酸的Boc基团被去封闭产生完整保护的肽树脂；(e)切割以及去保护被完整保护的肽树脂生成通式(I)的肽，其中所述切割和去保护包括：(i)在乙醇/极性非质子惰性溶剂混合物中制备被完整保护的肽树脂溶液；(ii)将溶液冷却到约0℃-约10℃；(iii)将氨气或乙胺气体缓慢通入溶液起泡，并保持冷却温度直到溶液被氨气充分饱和以产生饱和溶液；(iv)在无冷却条件下使饱和溶液混合大约15-36小时，直到大于95％的游离甲酯转化为相应的酰胺，条件是用氨气，或转化为相应的乙酰胺，条件是用乙胺气体；(f)从该溶液中分离肽。