通过检测人类T细胞受体TCR基因在治疗前后的变化来评价治疗HIV药物疗效的方法

摘要

发明提供一种通过设计的特定引物来完成PCR反应，放大感染HIV病毒的患者的T细胞受体TCR基因在接受药物治疗前后的变化，进而评价药物的疗效的方法，本发明提供的技术不但填补了技术上的空白而且具有灵敏度高，准确性好的优点。

主权项

1.通过检测人类T细胞受体TCR基因在治疗前后的变化来评价治疗HIV药物疗效的方法，其步骤为：a.血样经采集分离后，得到外周血单个核细胞(PBMC)，再进一步分离出CD4或CD8T细胞；b.分离和提纯出T细胞的mRNA后，通过mRNA合成得到cDNA；c.在极其靠近CDR3区段V基因区设计24个内侧Vβ基因引物和一个侧Cβ基因引物，C区基因引物的5′端插入七个非模板碱基(GTTTCTT)，Cβ基因引物采用高灵敏度的荧光(6-FAM)标记；d.将设计的引物和由mRNA合成的cDNA通过两次PCR反应来扩增cDNA；e.将经过两次PCR反应扩增并被荧光标记的T细胞受体基因，与甲酰胺混合后94℃变性，将样本置于含6％丙烯酰胺的测序凝胶中，在DNA测序机上运行，得到的数据用ABIPRISMGeneScan分析软件进行分析和量化，得出药物疗效的评价结果。