一种制备人载脂蛋白基因重组蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种人载脂蛋白ApoAI_Milano二聚体肽的制备方法，它采用基因重组技术将人的ApoAI_Milano基因克隆到表达载体上，构建成表达重组质粒，并转化进入大肠杆菌，组建成表达工程菌，经发酵、纯化工艺获得人ApoAI_Milano蛋白，它可用于治疗急性动脉粥样硬化斑块形成而导致的心绞痛、心肌梗死等冠状动脉综合症。

主权项

1、一种人载脂蛋白ApoAIMilano的制备方法，其特征在于1-1、采用RT-PCR技术从人肝细胞中获得人载脂蛋白基因片段；1-2、通过PCR直接位点突变的方法制得人载脂蛋白基因；1-3、将上述获得的人载脂蛋白基因克隆到PMD-T载体上，进行DNA序列测定，然后从PMD-T载体上切下，克隆到表达载体PMZG上，建成表达重组质粒pMZG-3，将此构建的表达人载脂蛋白重组质粒转化进入宿主菌大肠杆菌内，组建成工程菌；1-4、表达工程菌发酵、发酵液处理、纯化，得人载脂蛋白；1-5、纯化的人载脂蛋白用谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽处理，形成人载脂蛋白的二聚体肽。