| 主权项 |
1.一种固醇调控元件结合蛋白质(SREBP)途径特异抑 制剂之筛选方法,其包含下列步骤: (a)令至少2种培养细胞与SREBP途径之测试抑制剂接 触,其中该至少2种培养细胞系选自下述之细胞1)至 4),唯其当选择2种细胞时,细胞1)和4)之组合及细胞2 )和3)之组合系排除在外; 1)携带SREBP位点2蛋白(S2P)之细胞,且该细胞中的 SREBP切除活化蛋白质(SCAP)尚未对固醇丧失反应; 2)携带S2P之细胞,且该细胞中的SCAP已对固醇丧失反 应; 3)缺乏S2P之细胞,且该细胞中的SCAP尚未对固醇丧失 反应;及 4)缺乏S2P之细胞,且该细胞中的SCAP已对固醇丧失反 应;及 (b)藉由评估胆固醇合成及/或LDL受体活性以测量对 该SREBP途径之抑制作用。2.一种固醇调控元件结合 蛋白质(SREBP)途径特异抑制剂之筛选方法,其包含 下列步骤: (a)令其中SCAP已对固醇丧失反应之细胞与SREBP途径 之测试抑制剂接触;及 (b)藉由评估胆固醇合成及LDL受体活性以测量对该 SREBP途径之抑制作用。3.如申请专利范围第2项之 筛选方法,其包含下列步骤: (a)在作为SREBP途径抑制剂之测试药物存在或不存 在下,培养细胞(其中SCAP已对固醇丧失反应);及 (b)测量该细胞之胆固醇合成活性及LDL受体活性。4 .如申请专利范围第1项之筛选方法,其包含使用由 一种其中SCAP已对固醇丧失反应之细胞及一种其中 SCAP对固醇尚未丧失反应之细胞所形成的细胞组合 ,筛选类似固醇之SREBP途径特异抑制剂。5.如申请 专利范围第4项之筛选方法,其包含下列步骤: (a)在作为类似固醇SREBP途径抑制剂之测试药物的 不存在下,培养一种其中SCAP已对固醇丧失反应之 细胞及一种其中SCAP对固醇尚未丧失反应之细胞; 及 (b)测量该二种细胞之胆固醇合成活性或LDL受体活 性。6.如申请专利范围第1项之筛选方法,其包含使 用由缺少SREBP位点2蛋白(S2P)之细胞及带有S2P之 细胞所形成的细胞组合。7.如申请专利范围第6项 之筛选方法,其包括下列步骤: (a)在作为SREBP途径抑制剂之测试药物的存在下,培 养缺乏S2P之细胞及带有S2P之细胞;及 (b)测量该二种细胞之胆固醇合成活性或LDL受体活 性。8.一种固醇调控元件结合蛋白质(SREBP)途径特 异抑制剂之筛选方法,其包含下列步骤: (a)对细胞(其中SCAP对固醇尚未丧失反应),导入由报 导基因及编码SREBP C-端之基因组成之嵌合基因; (b)在作为SREBP途径抑制剂之测试药物的存在下,培 养该细胞以使该细胞表现该嵌合基因;及 (c)测量由该报导基因所产生之任何讯号。9.一种 固醇调控元件结合蛋白质(SREBP)途径特异抑制剂之 筛选方法,其包含下列步骤: (a)对细胞(其中SCAP对固醇尚未丧失反应),导入由报 导基因及编码SREBP C-端之基因组成之嵌合基因; (b)在作为SREBP途径抑制剂之测试药物的存在下,培 养步骤(a)之细胞以使该细胞表现该嵌合基因; (c)测量由该报导基因所产生之任何讯号; (d)对细胞(其中SCAP已对固醇丧失反应),导入使用于 该步骤(a)中相同的嵌合基因; (e)在作为SREBP途径抑制剂之测试药物的存在下,培 养步骤(d)之细胞以使该细胞表现该嵌合基因; (f)测量由该报导基因所产生之任何讯号;及 (g)比较步骤(c)测量之讯号与步骤(f)测量之讯号。 10.一种固醇调控元件结合蛋白质(SREBP)途径特异抑 制剂之筛选方法,其包含下列步骤: (a)对带有S2P之细胞,导入由报导基因及编码自SREBP 之第1个跨膜功能部位至SREBP位点1蛋白(S1P)切割 位置之延伸区的基因组成之嵌合基因; (b)在作为SREBP途径抑制剂之测试药物的存在下,培 养步骤(a)之细胞以使该细胞表现该嵌合基因; (c)测量由该报导基因所产生之任何讯号; (d)对缺乏S2P之细胞,导入使用于该步骤(a)中相同的 嵌合基因; (e)在作为SREBP途径抑制剂之测试药物的存在下,培 养步骤(d)之细胞以使该细胞表现该嵌合基因; (f)测量由该报导基因所产生之任何讯号;及 (g)比较步骤(c)测量之讯号与步骤(f)测量之讯号。 11.如申请专利范围第10项之筛选方法,其中该带有S 2P之细胞和缺乏S2P之细胞两者皆为其中SCAP对固醇 尚未丧失反应者。12.如申请专利范围第10项之筛 选方法,其中该带有S2P之细胞和缺乏S2P之细胞两者 皆为其中SCAP已对固醇丧失反应者。13.如申请专利 范围第8至12项中任一项之筛选方法,其中该报导基 因是带有细胞核定位讯号(NLS)序列之绿色萤光蛋 白质基因。14.如申请专利范围第8至12项中任一项 之筛选方法,其中该报导基因为GAL4/VP16融合基因。 15.如申请专利范围第1项之筛选方法,其中该突变 的培养细胞是源自CHO细胞的突变培养细胞。图式 简单说明: 图1。固醇调控元件的结合蛋白质(SREBP)之作用途 径。 图2。本图为以S1P及S2P切除SREBP、及以依据本发明 具体实施例引入及表现的嵌合基因所产生之SREBP 融合蛋白质的序列图。 图3。25RA细胞在西拉斯达廷(simvastatin)存在或不存 在下及DM7细胞在西拉斯达廷(simvastatin)不存在下, 其细胞存活率与两性霉素B浓度之间的关系。 图4。25-羟基胆固醇对CHO-K1细胞及25RA细胞中胆固 醇合成活性之影响。胆固醇合成活性系用两性霉 素B之细胞毒性测定法测量。 图5。在西拉斯达廷(simvastatin)存在下或不存在下 CHO-K1细胞及M19细胞的胆固醇合成活性。胆固醇合 成活性系用14C-乙酸盐并入测定法进行测量。 |
