一种单链DNA快速制备技术及试剂盒

摘要

本发明公开了一种单链DNA快速制备技术及试剂盒的制备方法。该技术快速、灵敏、纯度高，制备方法简便、成本低，适合各种规模不同核酸样品的DNA测序和探针制备。主要特征在于将一条引物通过固相合成或化学偶联等方法固定在固相基质微粒的表面获得固相引物，以靶核酸为模板在固相基质的表面进行固相PCR扩增，产物经加热变性，使DNA双链解链，而由固相引物延伸获得的DNA单链仍然保留在固相基质的表面；分离固/液相获得两条互补的DNA单链。运用本发明制备的单链DNA和RNA可用于核酸的测序，反义寡核苷酸药物的合成、单链探针的制备以及SELEX分子文库的构建等，可广泛地用于生物学、医药学、疾病预防、农牧业、食品与卫生、能源与化工、环境监测以及医学诊断与检测等领域。

主权项

1.一种单链DNA快速制备技术和试剂盒，至少包括下述步骤：①提供一种生物微粒，在模板的扩增反应中作为固相引物；其固相基质表面连接的寡核苷酸分子的序列与模板核酸分子互补；②将生物微粒与模板核酸分子，非固相引物、dNTPs与DNA聚合酶等混合，在生物微粒表面，通过固相聚合酶链反应(PCR)对模板核酸分子进行扩增；其中非固相引物或dNTPs中有一个可以是同位素、荧光素、生物素、半抗原、糖或多糖等的标记物；扩增反应至少完成一个循环，此循环包括a)加热变性；b)退火；c)在DNA聚合酶的作用下，寡核苷酸引物延伸，并固定在微粒表面；③离心漂洗数次去除残留的模板核酸分子、非固相引物、dNTPs与DNA聚合酶等；④加热变性，使扩增的DNA互补双链解链；⑤用分离器将固/液相分离，获得不同的分别位于固相和液相的单链DNA。