PROTEINA DE DEDOS DE CINC (ZFP) ARTIFICIAL AISLADA, PROTEINA DE FUSION AISLADA, ACIDO NUCLEICO, VECTOR DE EXPRESION, CELULA HOSPEDANTE, METODO PARA PREPARAR UNA PROTEINA DE DEDOS DE CINC, METODO PARA PREPARAR UN ACIDO NUCLEICO, METODO PARA DISENAR UNO O MAS DOMINIOS DE DEDOS DE CINC, METODO PARA DIS

摘要

Una proteína de dedos de cinc (ZFP) artificial aislada para ser ligada a una secuencia objetivo de ácidos nucleicos, que comprende por lo menos tres dominios de dedos de cinc covalentmente unidos entre sí mediante 0 a 10 residuos de aminoácidos, donde los aminoácidos están en las posición -1, 2, 3 y 6, de la alfa-hélice de dedos de cinc, seleccionados como sigue: en la posición -1, el aminoácido es arginina, glutamina, treonina, metionina o ácido glutámico; en la posición 2, el aminoácido es serina, asparagina, treonina o ácido aspártico; en la posición 3, el aminoácido es histidina, asparagina, sería o ácido aspártico; y en la posición 6, el aminoácido es arginina, glutamina, treonina, tirosina, leucina o ácido glutámico; o que comprende por lo menos tres dominios de dedos de cinc, cada uno de los dominios de dedos de cinc, independientemente entre sí, está representado por la fórmula: -X3-Cys-X2-4-Cys-X5-Z-1-X-Z2-Z3-X2-Z6-His-X3-5-His-X4-, dichos dominios están independientemente covalentemente unidos entre sí con 0 a 10 residuos de aminoácidos; X es, independientemente, un aminoácido cualquiera, y Xn representa la cantidad de veces que X se presenta en la cadena polipeptídica; Z-1 es arginina, glutamina, treonina, metionina o ácido glutámico; Z2 es serina, asparagina, treonina o ácido aspártico; Z3 es histidina, asparagina, serina o ácido aspártico; y Z6 es arginina, glutamina, treonina, tirosina, leucina o ácido glutámico; con la condición que en cada caso dicha ZEP no tenga una secuencia de aminoácidos que comprende alguna de las SEQ ID NOS. 3-12; proteínas de fusión aisladas con dominios de ZFP de acuerdo con la presente, ácidos nucleicos y vectores de expresión que codifican estas ZFPs y proteínas de fusión, células hospedantes y métodos para preparar las ZFPs y proteínas de fusión, métodos para preparar ácidos nucleicos, métodos para disenar uno o más dominios de dedos de cinc, métodos para disenar una proteína de dedos de cinc de múltiples dominios, métodos para vincular un ácido nucleico objetivo con una proteína de dedos de cinc artificial, métodos para vincular un ácido nucleico objetivo con una proteína de dedos de cinc de múltiples dominios, métodos para modular la expresión de un gen, métodos para alterar la estructura genómica, métodos para inhibir la replicación viral, transposasas artificiales, métodos para la introducción específica para un objetivo de un gen exógeno en el genoma de un organismo, métodos para la escisión específica para un objetivo de un gen exógeno desde el genoma de un organismo, métodos para detectar una secuencia alterada de reconocimiento de dedos de cinc, métodos para diagnosticar una enfermedad asociada con una estructura genómica anormal, conjuntos de oligonucleótidos, conjuntos de 256 oligonucleótidos separados disenados para apuntar los 256 objetivos de 4 pares de bases y permitir la producción de todas la ZFPs de tres dedos posibles (es decir, más de 10 (6)) de un total de 768 oligonucleótidos, equipos, y oligonucleótidos mono- o bifilamentos.