一种乙酰胆碱酯酶的制备方法

摘要

一种用于果蔬中农药残留量测定的乙酰胆碱酯酶的制备方法，本发明以动物血液为酶源，其工艺步骤包括从酶源中提取乙酰胆碱酯酶粗提液，以及用硫酸铵沉淀法纯化乙酰胆碱酯酶和用透析法脱硫酸铵，再将酶液浓缩，干燥，即得已纯化的乙酰胆碱酯酶制品。本发明所提供的乙酰胆碱酯酶的制备方法，其动物血液原料来源广泛，制备工艺简单稳定，生产成本较低。用本发明方法所制备的乙酰胆碱酯酶产品，产品纯度高，经测定，用于对残留农药的检测，具有较高灵敏度，经本发明纯化后的乙酰胆碱酯酶灵敏度比酶粗提液提高4倍以上。

主权项

1.一种从动物血液中提取乙酰胆碱酯酶的制备方法，包括以下工艺步骤：(1)将新鲜动物血液于室温下凝固后，于0～4℃下冷冻2～48小时，取其上清液；(2)将上一步所得的上清液以2000～15000r.p.m，0～4℃离心，取其上清液，即得乙酰胆碱酯酶粗提液；(3)用硫酸铵沉淀法纯化乙酰胆碱酯酶：a、在冰浴中于乙酰胆碱酯酶粗提液中缓慢搅拌下加入硫酸铵，使酶液中硫酸铵的饱和度在20％～90％的范围内；b、上述所得溶液于3000-15000r.p.m，0-4℃冷冻离心，保留沉淀；c、加入pH7.5-8.0的磷酸缓冲液溶解沉淀，并用pH7.5-8磷酸缓冲液稀释2-10倍；(4)用透析法脱硫酸铵：将上步经过硫酸铵沉淀的酶液装入透析袋中，用其体积20～30倍的蒸馏水透析，直至透析液不产生沉淀为止；(5)将上一步所得的酶液浓缩，干燥，即得已纯化的乙酰胆碱酯酶制品。