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1、一种两步发酵法生产酵母胞外海藻糖的方法，通常它包括：菌体培养、海藻糖的合成、海藻糖的提取、分离、纯化、浓缩、结晶、干燥，其特征在于：采用两步发酵法利用酵母细胞中的海藻糖合成酶系合成胞外海藻糖，同时钝化酵母的海藻糖分解酶活性，并用混合床离子交换系统分离纯化海藻糖，其具体方法如下：(1)应激态酵母细胞培养：采用现有技术的氮饥饿、热休克、渗透胁迫方法，诱导酵母细胞产生较多的应激酶——海藻糖合成酶系，胁迫生长型酵母细胞向应激态酵母细胞的转变；(2)胞外海藻糖的合成：首先采用物理或化学的方法对应激态酵母细胞进行休克处理；然后采用海藻糖合成培养基进行胞外海藻糖的合成；摇瓶试验为500mL三角瓶，装液量60～120mL，转速100～180r/min；发酵罐试验采用5L自控罐以流加葡萄糖的方式进行胞外海藻糖合成，其生产工艺是：初始装液量2.5L，初始糖浓度为1～2％，pH4.0～70，溶氧10％～40％，合成温度40～48℃；反应过程中用10％Na2CO3调节pH，并可根据消耗的糖量补加葡萄糖液，最终反应液量为3L，反应液海藻糖含量可达10～16g/L；(3)海藻糖的分离与纯化：将反应液离心除酵母细胞，取上清液高温灭菌，用截留分子量为10000的中空纤维超滤装置过滤除大分子物质；随后采用混合床离子交换柱分离海藻糖和葡萄糖； |
