重组人糖原磷酸化酶同工酶BB和应用甲醇酵母制备的方法及其应用

摘要

本发明涉及应用甲醇酵母生产重组人糖原磷酸化酶同工酶BB及其生产方法和它的应用。提供一种对AMI的早期诊断具有敏感性和特异性，且使用成本低的应用甲醇酵母生产的重组人糖原磷酸化酶同工酶BB及其生产方法和它的应用。本发明的方法为：①按酵母嗜好的密码子人工合成糖原磷酸化酶同工酶BB免疫显性片段的编码基因，融合于酵母表达调控元件，构建甲醇酵母高表达工程菌；②甲醇酵母工程菌高密度发酵表达；③采用超滤、葡聚糖凝胶层析、离子梯度凝胶层析等纯化技术的顺序组合，纯化回收GPBB；④应用该蛋白质产生抗GPBB抗体。本发明的优点：(1)具有强有力的乙醇氧化酶基因(A0X1)启动子，可高效严格调控外源蛋白的表达；(2)作为真核表达系统，可对表达的蛋白进行翻译后的加工和修饰，从而使表达出的蛋白具有很高的生物活性；(3)表达量高，可高密度发酵培养，且营养要求低，生长快，培养基廉价便于工业化生产；(4)表达的蛋白可分泌至胞外，而Pp自身分泌的蛋白(背景蛋白)非常少，十分有利于纯化；(5)糖基化程度适当，对人体无明显的抗原性，适合于临床治疗用途。

主权项

1、一种应用甲醇酵母制备重组人糖原磷酸化酶同工酶BB的方法，其特征在于：①按酵母使用频率高的密码子人工合成糖原磷酸化酶同工酶BB的编码基因，融合于酵母表达调控元件，构建甲醇酵母高表达工程菌；②甲醇酵母工程菌高密度发酵表达；③采用超滤、葡聚糖凝胶层析、离子梯度凝胶层析、亲和层析等纯化技术的顺序组合，纯化回收GPBB。