聚合酶天然底物结合法测定单点DNA序列

摘要

本发明涉及测定脱氧核糖核酸(DNA)序列中单个碱基的序列，特别是应用于检测与分析多态性(SNP)。本发明公开了一种通过将单链DNA分子与一个寡核苷酸引物杂交，再利用聚合酶分别将不同的带标记的三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)在所述引物上结合延伸的方法来测定所述DNA分子上单个预先选定位点的序列的方法。

主权项

1.一种通过将单链DNA分子与一个寡核苷酸引物杂交，再利用聚合酶分别将不同的带标记的三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)在所述引物上结合延伸的方法来测定所述DNA分子上单个预先选定位点的序列的方法，包括以下几个步骤：e)将一份或多份所述单链DNA分子与一份或多份所述寡核苷酸引物一起杂交，此处所述单链DNA分子包含有所述单个预先选定位点，并且在所述预先选定位点的3’端有18或以上个核苷酸；同时所述寡核苷酸引物长度为20个左右，与所述单链DNA互补，并且其3’端正好位于所述单个预先选定位点的前一个核苷酸；f)将所述杂交产物与一个核苷酸聚合酶一起培养，并加以一种带标记的三磷酸脱氧核苷酸，这样如果所述这种三磷酸脱氧核苷酸正好与所述单个预先选定位点的核苷酸互补，那么一个由聚合酶调节的结合延伸反应将会发生，所述带标记的三磷酸脱氧核苷酸将会被结合到所述杂交产物中的所述寡核苷酸引物上；g)测定带有所述标记的延伸反应产物是否产生；h)以不同的带标记三磷酸脱氧核苷酸重复所述聚合酶调节的结合延伸反应，如果所有四种三磷酸脱氧核苷酸都重复，就可以测定所述单个预先选定位点的序列和多态性。