Ⅱ型胶原酶联免疫检测分析方法

摘要

本发明公开了一种II型胶原酶联免疫检测分析方法，利用一株单克隆抗体通过抗体包板、洗板、封板、加样、再加入同一株抗体、加入酶标二抗及底物液后加入终止液，测定吸光率等程序步骤，对关节炎患者活动物的血清进行II型胶原吸光度的测定，通过多组测定值与正常值进行比较，就可得出II型胶原含量得半定量结果，从而就可了解软骨降解的病理变化规律，正确评价手术效果，具有广泛的应用意义。

主权项

1、一种II型胶原酶联免疫检测分析方法，其特征在于：包括下列步骤：(1)、包板：用PH＝9.6、50mmol/L的碳酸盐缓冲液稀释鼠抗人II型胶原II-4C11单克隆抗体，浓度为4μg/ml，将抗体包被液加入酶联板中200μl/孔，37℃条件下放置1小时，或4℃条件下过夜；(2)、洗板：将板内包被液弃去，用洗板机每孔加入洗液300μl，洗板3次；如人工洗板，则洗板5次，每次放置5分钟；(3)、封板：每孔加入灭活正常兔血清封板液200μl，在室温条件下保存2小时；(4)、洗板：同步骤(2)，并将该板放入0-4℃冰箱，待用；(5)、加样：将人或动物样品及质控血清用分析缓冲液稀释50倍，然后取100μl分别加入每孔，放37℃孵育2小时；(6)、洗板：同步骤(2)；(7)、加入抗体：将鼠抗人II型胶原II-4C11单克隆抗体用50mmol、PH＝7.4分析缓冲液稀释成3μg/ml，向板中每孔加入100μl，在37℃条件下孵育1小时；(8)、洗板：同步骤(2)；(9)、用50mmol、PH＝7.4分析缓冲液将羊抗鼠IgG做1∶1000的稀释，向板中每孔加入100μl，在37℃条件下孵育0.5小时；(10)、洗板：同步骤(2)，反复洗3次；(11)、取等体积A、B底物液混匀，每孔加入200μl，在室温条件下放置15-20分钟；(12)、加入终止液，每孔加入50μl；(13)、用酶免测定仪在450nm波长处测定吸光率。