注射用复方胰核糖核酸的制备方法

摘要

本发明公开了一种注射用复方胰核糖核酸的制备方法，它是以牛胰脏为原料，先后经过前处理，匀浆，提取，除蛋白，沉淀，纯化，除菌，过滤和冻干等程序制成，含有胰核糖核酸，硒和脾细胞内转移因子，具有抗癌，抗衰老和增强免疫功能，配合手术，本药物和中药，疗效显著，减轻放，化疗的毒副反应，能使癌细胞引起空泡样变性，癌细胞溶解，液化性坏死，在其周围大量增生纤维芽细胞，巨噬细胞和淋巴细胞，以结缔组织代替癌组织。

主权项

1.一种注射用复方胰核糖核酸的制备方法，其特征是： A.将新鲜健康的牛胰脏组织被膜和脂肪组织剥去，称取1 公斤牛胰脏组织，放入0.3％十二烷基硫酸钠缓冲液中进行清洗， 以洗净为止，其用量为每公斤牛胰脏放入2倍体积的0.3％十二 烷基硫酸钠缓冲液， B.所述0.3％十二烷基硫酸钠缓冲液其配制方法为，称取 十二烷基硫酸钠24克，放入配制试剂容器内，同时加入氯化钠 72克和亚硒酸钠3克，随之加入去离子水5000毫升，其水温 为60℃，待其完全溶解后，再加入浓度为2.5摩尔/升，PH值 为5.1的乙酸钠溶液32毫升，最后再加入去离子水至8000毫 升，PH值为6.5-7.0，备用， C.将清洗干净的牛胰脏组织，经过粗、细2次研磨，使牛 胰脏组织细胞破裂为止，制得牛胰脏组织匀浆液， D.将牛胰脏组织匀浆液加入提取容器内，并加入6倍体积 0.3％十二烷基硫酸钠缓冲液6000毫升，其PH值为6.5-7.0， 经混摇使其充分混均，其温度为58℃，边混摇边放入5倍体积 的0.1％8羟基喹啉-90％苯酚溶液5000毫升和氯仿1500毫升， 经振荡机上的恒温流水管，其恒温温度为58℃，并振荡20分 钟，振荡次数为120次/分，随之经冷却流水管进行冷却，当冷 却温度达到18℃时为止，冷却时间为20分钟，再经过大容量 离心机进行分离，其转效为3000转/分，时间为20分钟，利用 真空泵吸取上清液，弃去沉淀物， E.所述0.1％8羟基喹啉-90％苯酚溶液，配制方法为，称 取再蒸馏的苯酚9000克放入水浴中，随之加入去离子水1000 毫升，水浴温度为60℃，待已经过再蒸馏的苯酚溶解后，再加 入8羟基喹啉10克，便制得0.1％8羟基喹啉-90％苯酚溶液， 备用， F.所述氯仿用量为5000毫升，备用， G.向被提取的含有牛胰核蛋白体的上清液中加入2/4体积 的0.1％8羟基喹啉-90％苯酚溶液2000毫升，同时加入1/4体 积的氯仿，氯仿加入量小于750毫升，再依次经过振荡机进行 振荡和大容量离心机进行分离，其振荡次数为120次/分，振荡 时间为20分钟，离心机转数为3000转/分，离心时间为20分 钟，最后取其上清液，弃去沉淀物，如此反复按上述方法操作 3次，吸取上清液，达到中间无蛋白层为止，进行除蛋白， H.测量其上述上清液，根据上清液的总体积加入将浓度 2.5摩尔/升的乙酸钠溶液换算为浓度0.15摩尔升的乙酸钠溶 液，其PH值为5.1，经混均后，加入2倍体积的98％乙醇，乙 醇保存温度为-20℃，经混均后，在夜间放置2-12小时，其温 度为4℃，使粗胰核糖核酸进行沉淀， I.所述浓度2.5摩尔/升的乙酸钠溶液，其配制方法为， 将无水乙酸钠205克，其分子量为82.03放入容器内，随之加 入去离子水500毫升，待无水乙酸钠完全溶解后，加入浓盐酸 62.5毫升，再放入去离子水至1000毫升，经调制使其PH值达 到5.1，便制得2.5摩尔/升乙酸钠溶液1000毫升，再经过分 装密封和高压灭菌，备用， J.所述98％乙醇的用量为10000毫升，保存温度为-20℃， 备用， K.所述90％乙醇的用量为10000毫升，保存温度为-20℃， 备用。 L.将粗胰核糖核酸沉淀物移入大容量离心机内，离心机转 数为3000转/分，离心时间为20分钟，弃去上清液，取其沉淀 物，加入2倍体积0.15摩尔/升的乙酸钠溶液和2.5倍体积的 90％乙醇溶液，经过混均后，放置1小时，温度保持4℃，离心 机转数为3000转/分，离心时间为20分钟，弃去上清液，取其 沉淀物，如此反复按上述方法纯化三次，加入2倍体积0.15摩 尔/升的乙酸钠，经混匀后，再加入2.5倍体积的90％乙醇，汇 集沉淀物并存放于冰室内，冰室温度为-20℃，待存放的沉淀物 数量达到批量生产时，移入大容量冷冻离机内进行分离，离心 机转数为3500转/分，离心时间30分钟，弃去上清液，取其沉 淀物硒化胰核糖核酸，再以牛脾透析24小时外液，即牛脾转移 因子，按60毫升/公斤牛胰脏的比例进行溶解，随之对被提取 的复方胰核糖核酸(RNA)的含量，硒含量，脱氧核糖核酸(DNA) 的含量，波长A260/A280比值和热原试验进行测定，使硒化胰 核糖核酸最终浓度被稀释为25毫克/毫升，最后经过除菌，过 滤，分装和冻干程序，即被制成冻干粉针剂，每支含有50毫克 复方胰核糖核酸， M.所述浓度0.15摩尔/升乙酸钠溶液，其配制方法为，称 取浓度为2.5摩尔/升，PH值5.1的乙酸钠溶液60毫升，再加 入去离子水至1000毫升，便制得浓度为0.15摩尔/升乙酸钠溶 液1000毫升，备用。