牛乳腺炎疫苗的制备方法

摘要

本发明公开了一种牛乳腺炎疫苗的制备方法。本发明提供了利用含有核心通用抗原的革兰氏阴性菌，通过含有蔗糖－6果糖转移酶(sacB)基因质粒的转化，在蔗糖的诱导下，使革兰氏阴性菌自杀，收集这些含有核心通用抗原的革兰氏阴性菌，制备牛乳腺炎的疫苗的方法。本发明牛乳腺炎疫苗的制备方法不会对疫苗的免疫原性造成损害，不会产生替代的或非天然的疫苗抗原，所用的化学诱导物质是食用的无毒的蔗糖。同时可以大大减少疫苗中的内毒素，减少副作用，刺激免疫系统抵御全部的大肠杆菌，沙门氏菌等革兰氏阴性菌所引起的牛乳腺炎。

主权项

1.一种制备牛乳腺炎疫苗的方法，包括如下步骤：a.提取含有蔗糖-6果糖转移酶(sacB)基因的质粒；b.制备革兰氏阴性菌感受态细胞；c.转化步骤a中提取含有的蔗糖-6果糖转移酶(sacB)基因的质粒进入步骤b所制备的革兰氏阴性菌感受态细胞中；d.鉴定，获得转化的革兰氏阴性菌；e.已转化的革兰氏阴性菌在细菌培养基中生长直到浓度达到105-1012CFU/ml；f.收集步骤e中的已转化的革兰氏阴性菌，室温，400g，离心20分钟；g.弃上清液，用1-10％(体积比)的蔗糖和清洗物质清洗疫苗，重悬浮，在37℃下，混合20分钟，诱导自杀性蔗糖-6果糖转移酶(sacB)基因表达，混合物在400g，4℃下再次离心，弃上清液；h.重复步骤g两次；i.疫苗在清洗物质中被悬浮，按佐剂和疫苗体积比为3∶2的比例加入佐剂，使疫苗每一次免疫量的浓度为8.0×105CFU或以上。