| 摘要 |
<p>Zp sob amplifikace p°inejmenÜ m jednoho restrik n ho fragmentu z v²choz DNA, p°i kter m se (a) v²choz DNA Üt p p°inejmenÜ m jednou restrik n endonukle zou a z skaj se restrik n fragmenty, (b) tyto fragmenty se liguj s alespo jedn m syntetick²m dvou°et zcov²m oligonukleotidov²m adaptorem, jeho jeden konec je kompatibiln pro ligaci s jedn m nebo ob ma konci restrik n ch fragment , m se p°iprav ozna en restrik n fragmenty, (c) tyto fragmenty se za hydridiza n ch podm nek p°ivedou do kontaktu s alespo jedn m oligonukleotidov²m primerem, p°i em tento primer nebo primery obsahuj nukleotidovou sekvenci p ruj c s st rozpozn vac sekvence restrik n endonukle zy p° tomn v ozna en m restrik n m fragmentu a tak p ruj c s st adaptorov sekvence, p°i em alespo jeden z uveden²ch primer obsahuje na sv m 3'-konci zvolenou sekvenci obsahuj c p°inejmenÜ m jeden nukleotid um st n² bezprost°edn vedle nukleotid · astn c ch se vytvo°en dan rozpozn vac sekvence, (d) ozna en restrik n fragmenty hybridizovan na uveden² primer nebo primery se amplifikuj v p° tomnosti po adovan²ch nukleotid a DNA polymer zy nebo se provede elongace t chto hybridizovan²ch primer pod l ozna en²ch restrik n ch fragment , a (e) amplifikovan nebo elongovan DNA fragmenty z skan ve stupni (d) se identifikuj nebo izoluj ./</p> |
