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Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von linearen DNA-Fragmenten für die in vitro Expression von Proteinen, bei welchem ein lineares DNA-Fragment, welches zur Expression nötige Kontrollelemente enthält, und das Protein-codierende Gen, welches an beiden Enden komplementäre Regionen zu den beiden Enden des linearen DNA-Fragments aufweist, gemeinsam amplifiziert werden mit einem Primerpaar, das upstream und downstream der Expressionskontrollregionen auf dem linearen DNA-Fragment bindet, dadurch gekennzeichnet, daß das lineare DNA-Fragment herstellbar ist durch die Linearisierung eines Expressionsvektors. Des weiteren wird ein Verfahren offenbart, das die Bereitstellung des Protein-codierenden Gens betrifft, welches an den Enden überlappende Regionen zum linearen DNA-Fragment aufweist. Die vorliegende Erfindung umfaßt weiterhin die erfindungsgemäßen linearen DNA-Fragmente für die in vitro Expression von Proteinen, die Verwendung dieser Fragmente, Kits enthaltend die erfindungsgemäßen linearen DNA-Fragmente für die in vitro Expression von Proteinen, sowie Verfahren zur in vitro Expression von Proteinen, ausgehend von den erfindungsgemäßen linearen DNA-Fragmenten.
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