| 主权项 |
1、一种未成熟小孢子胚直接萌发成植株的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：A、小孢子的制备：选取小孢子处于单核晚期的新鲜花蕾，消毒，无菌水洗去消毒液，在B5培养基中轻轻挤压花蕾，使小孢子游离至培养基中，过筛除花蕾组织残渣，离心收集小孢子；B、小孢子胚的诱导：用NLN-13培养基调小孢子密度至1-2×105/mL，分装小孢子于培养皿中，32℃恒温暗培养14天，移至25℃，2-10μmol·s-1·m-2，培养8-11天，再用NLN-0培养基稀释至300-400胚状体/3.5cm培养皿，弱光培养10-16天，形成未成熟小孢子胚；C、小孢子胚的选择：用于萌发的小孢子胚是刚生根，或还未生根，下胚轴较短，长度小于5mm未分化完全的胚；D、小孢子胚的萌发：将未分化完全的胚的根插入含附加氯化钙和硝酸铵的MS固体培养基中，在28-35℃恒温，在光照为2-10μmol·s-1·m-2时，培养12-16天形成植株，其中未成熟小孢子胚的培养基的组成是： MS常用培养基 500毫升 水 500毫升 氯化钙 300-600毫克 硝酸铵 80-120毫克 硫胺(维生素B1) 2-6毫克 维生素H 0.04-0.06毫克 叶酸 0.4-0.6毫克 维生素B6 0.8-1.2毫克 烟碱酸 4-6毫克 氨基乙酸 1-3毫克 谷氨酰胺 6-10毫克 天冬酰胺 3-5毫克 蔗糖 20-30毫克 琼脂 6-10毫克 调PH至5.3-6.0。 |
