烟草为原料制备辅酶Q<SUB>10</SUB>的方法

摘要

本发明是以烟草为材料，经过诱导、继代和悬浮培养，产生生长快、辅酶Q₁₀含量高的烟草悬浮培养细胞。收集细胞加入丙酮研磨，过滤。滤液用石油醚萃取。萃取液浓缩后，经硅胶柱层析纯化，用乙醚-石油醚混合液浓度线性梯度洗脱，收集洗脱液。除去有机溶剂，加乙醇溶解。密封，结晶，离心收集辅酶Q₁₀结晶。产率达500-510ug/g干细胞，回收率为57-59％，纯度达98％以上。此发明为辅酶Q₁₀生产开拓了新途径，也为辅酶Q₁₀药源国产化奠定了基础。

主权项

1、烟草为原料制造辅酶Q10的方法，其特征在于：(1)愈伤组织诱导：取烟草植体，洗净，70％乙醇溶液浸泡，再用0.1％氯化汞溶液消毒，无菌水冲洗除去浸泡液和消毒液，在无菌条件下，切成小块，接种于诱导培养基上，置16-32℃培养箱中黑暗培养至形成愈伤组织；(2)继代培养：将上述愈伤组织转入继代培养基中进行继代培养，产生疏松愈伤组织；(3)悬浮培养出种子细胞：将上述疏松愈伤组织，转入悬浮培养基中培养出种子细胞；(4)辅酶Q10提取：用丙酮作为抽提溶剂，将烟草悬浮培养细胞与丙酮1∶2的质量/体积比混合，研磨，过滤，残渣重复2次以上，合并滤液，用0.5倍滤液体积的30-65℃石油谜作萃取剂进行萃取，所得石油醚萃取液为辅酶Q10的石油醚提取液；(5)辅酶Q10分离纯化：将石油醚提取液用蒸发法浓缩至原体积的1/5，上硅胶柱用体积分数为4％的乙醚—石油醚浓度混合液性梯度洗脱，收集黄色部分洗脱液，为辅酶Q10纯化液；(6)结晶：将纯化辅酶Q10溶液于60℃水浴上蒸发除去有机溶剂后，加入无机乙醇溶解，密封于4-8℃冰库中结晶，结晶完全后离心，收集结晶，即为辅酶Q10产品。