不结球白菜原生质体培养及再生植株方法

摘要

本发明属于植物原生质体培养及植株再生方法，专用于不结球白菜原生质体培养再生植株。所提供的不结球白菜原生质体培养及植株再生方法具体步骤如下：取5天苗龄的不结球白菜萝卜细胞质雄性不育材料下胚轴或14～18天苗龄子叶，在1.0～2.0％(M/V)纤维素酶+0.1～1.0％(M/V)果胶酶+10mMCaCl₂·2H₂O+0.7mMKH₂PO₄+0.5M甘露醇的酶液中游离25～60hr，500rpm下离心收集原生质体；原生质体在KM8P₁+2，4-D0.5mg/L+6-BA0.25mg/L+NAA0.5～1.0mg/L的培养基上，培养3周形成愈伤组织；经MS+2，4-D1.0mg/L增殖愈伤组织；在培养基为MS+6-BA10.0mg/L+NAA0.3mg/L上芽分化。将上述分化芽在MS培养基上生根，2周后即可获得完整的再生植株。使用该方法，植株再生率为1.8％。

主权项

1.不结球白菜原生质体再生植物的方法，具体步骤如下： 1)取5天苗龄的不结球白菜萝卜细胞质雄性不育材料下胚轴或 14～18天苗龄的子叶，在1.0～2.0％(M/V)纤维素酶+1.0％(M/V)果胶 酶+10mMCaCl₂·2H₂O+0.7mMKH₂PO₄+0.5M甘露醇的酶液中游离 25～60hr，500rpm下离心收集原生质体； 2)原生质体在KM8P₁+2，4-D0.5mg/L+6-BA0.25mg/L+NAA0.5～1.0mg/L 的培养基上，培养3周形成愈伤组织； 3)经MS+2，4-D1.0mg/L增殖愈伤组织； 4)在培养基为MS+6-BA10.0mg/L+NAA0.3mg/L上形成不定芽。