利用重组噬菌体在膜生物反应器中连续生产蛋白质的方法

摘要

本发明是一种利用重组噬菌体在膜生物反应器中连续生产蛋白质的方法，利用DNA重组技术，将外来的目标蛋白融合在丝状噬菌体的截断的基因3蛋白上，在膜生物反应器系统里实行高密度培养大肠杆菌宿主，连续生产重组噬菌体，并在重组噬菌体上的外来蛋白和基因3蛋白之间预先设计一个蛋白酶酶切识别位点，利用蛋白酶水解重组噬菌体，水解后的蛋白质溶液通过亲和色谱分离纯化外来蛋白质，实现了连续生产外来稀有蛋白质，并使该蛋白质保持原来的高度生物活性。

主权项

1、一种利用重组噬菌体在膜生物反应器中连续生产蛋白质的方法，其特征在于(1)、利用DNA重组技术，将外来的目标蛋白融合在丝状噬菌体的基因3蛋白上，该基因3蛋白为截断的基因3蛋白，去除了其N-末端的部分氨基酸；(2)、在重组噬菌体的外来蛋白和基因3蛋白之间的融合位置中设计有一蛋白酶酶切位点，将重组的表达噬菌粒转化大肠杆菌宿主细胞；(3)、在膜生物反应器中，将包含重组噬菌粒的大肠杆菌细胞进行间歇搅拌发酵，并通入无菌空气，培养液的pH值控制在5～7之间，生产过程中发酵温度为28～42℃；(4)、1～2个小时后添加辅助噬菌体；(5)、间歇发酵5～8个小时后开始进行料液循环，转为连续培养，选择微过滤膜孔径为0.2～0.3μm，每小时循环量为反应器料液的1.5～3.0倍，连续生产的稀释率为0.1～0.2，循环后同时进料，同时出料，保持稳态生产过程；(6)、在产品中加入蛋白酶，进行蛋白酶解反应，然后通过亲和色谱分离和纯化目标蛋白质。