海葵毒素新基因的克隆、表达及生物活性

摘要

本发明通过构建侧花海葵(Anthopleura sp)触手cDNA文库和DNA测序，并根据海葵神经毒素蛋白的两端保守氨基酸序列，设计简并引物，用RT－PCR的方法，分离出1个新的海葵多肽神经毒素基因，命名为su。新基因长度为141bp，编码47个氨基酸的成熟肽(序列号码1)。所表达的蛋白质等电点为7.9，分子量约为4,800道尔顿。将su克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pETTRX的trxA基因3’末端，构建符合读码框的融合基因，该融合蛋白在大肠杆菌中以胞内可溶的形式存在，表达量可达100～120mg/L。通过Ni－Chelating亲和色谱层析，蛋白酶3C切割和凝胶过滤，得到纯度在95％以上成熟的重组海葵神经毒素蛋白，得率为10～15mg/L。该蛋白对大鼠离体心脏具有强烈地促收缩作用。

主权项

1.一种如序列表中序列号码1所示核苷酸序列的DNA。