METHOD FOR COMPARING TWO PROTEIN STATES

摘要

Zunächst werden die freien Aminogruppen der hinsichtlich Ihrer Zusammensetzung miteinander zu vergleichenden Proteingemische (I) und (II) derivatisiert, wobei das hierzu dem Proteingemisch II zugesetzte Reagens mit einem nicht-radioaktiven schwereren Isotop markiert, das dem Proteingemisch (I) zugesetzte, ansonsten chemisch identische Reagens dagegen unmarkiert ist. Nach möglichst vollständiger Umsetzung mit dem zugesetzten Reagens werden die beiden Proteingemische zusammengeführt und gemischt, um sicherzustellen, dass alle nachfolgenden Schritte für die aus beiden Proteingemischen stammenden Proteine unter identischen Bedingungen erfolgen. Anschliessend erfolgt eine gel-elektrophoretische Trennung des erhaltenen neuen Proteingemischs in Fraktionen. Die Proteine jeder Fraktion werden jeweils einer chemischen oder enzymatischen Spaltung in Peptide unterzogen. Die erhaltenen Peptidfraktionen werden massenspektrometrisch (MS, MS/MS) analysiert. Im resultierenden Massenspektrogramm (11) sind einander entsprechende Peptide jeweils als Doppelpeaks zu erkennen. Aufgrund der Höhe der einander entsprechenden Peaks sind die zugehörigen Peptide relativ zueinander quantifizierbar.