大豆未成熟子叶体细胞胚增殖、继代保存和植株再生方法

摘要

一种大豆未成熟子叶体细胞胚增殖、继代保存和植株再生方法，涉及农作物组织培养方法技术领域，由大豆体细胞胚胎发生的诱导，大豆体细胞胚的增殖与继代保存，大豆体细胞胚的萌发与再生植株步骤完成。本发明是以栽培大豆未成熟子叶为外植体诱导体细胞胚胎发生，在固体培养基上诱导体细胞胚增殖，同时，在固体培养基上继代保存，增殖与保存的体细胞胚可正常萌发，进一步再生植株，解决了大豆体细胞胚在固体培养基上增殖和长期继代保存之后诱导植株再生问题。

主权项

1、一种大豆未成熟子叶体细胞胚增殖、继代保存和植株再生方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)、大豆体细胞胚胎发生的诱导：以MS培养基附加10-40mg/L 2，4-D(pH＝5.8-6.2)在25±1℃黑暗条件下诱导大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生，培养30-60天可见体细胞胚胎发生。(2)、大豆体细胞胚的增殖与继代保存：在产生的体细胞胚中挑选没有被周围的愈伤所吞食掉，直径在0.9-1.1毫米的黄绿色、小颗粒状的、成簇的球形胚，转接在MS培养基附加10-40mg/L 2，4-D(pH＝5.8-6.2)在25±1℃弱光16小时条件下诱导体细胞胚增殖，每隔12-16天换一次新鲜的培养基，继续挑选黄绿色、小颗粒状的、成簇的球形胚培养，去掉愈伤组织与大颗粒球形胚。(3)、大豆体细胞胚的萌发与再生植株：将体细胞胚转入到MS培养基中(加0.5-1％的活性炭、5-10％蔗糖、pH＝5.8-6.2)25±1℃光照16小时条件下培养，15-20天继代一次，30-60天体细胞胚萌发，萌发的体细胞胚再转入1/2MS或MS(2倍铁盐、pH＝7.0)培养基中在25±1℃光照23小时条件下培养，经25-35天再生植株。