主权项 |
1、一种组织工程全层皮肤的制备方法,包括将原料的表皮和真皮分离、细胞的三维培养,其特征是:1.1准备胶原溶液:在无菌条件下将复合胶原溶于0.1%的醋酸中,再用紫外线照射胶原溶液;1.2防止胶原凝胶收缩:将无菌尼龙膜置入培养板孔中,用1.1所述的复合胶原溶液浸湿放孵箱中使其固化,再把尼龙膜浸入含戊二醛的磷酸钠盐缓冲液(PBS,下同)内放置,并用该溶液冲洗和用成纤维细胞培养液冲洗,之后置于最低必须培养液(DMEM,下同)中进行培养;1.3细胞的三维培养:将无菌尼龙膜置入培养皿内滴加胶原溶液固化,再把尼龙膜浸入含1%戊二醛的PBS中,待后用成纤维细胞培养液冲洗,然后置于成纤维细胞培养液中静置;再将尼龙膜放在培养皿中,准备胶原溶液,用紫外线照射后加入DMEM和胎牛血清(FBS,下同)用NaOH中和混合,加入成纤维细胞悬液后放入孵箱内固化,然后加入成纤维细胞培养液培养;1.4真皮、表皮分离后用胶原酶消化真皮组织。 |