| 主权项 |
1、一种构建反义基因克隆载体方法，适用于基因沉默研究的基因功能鉴定分析和转基因生物的创造，所指的生物包括植物、微生物和动物，所指的基因为DNA和cDNA的片段或全长，所指的位点特指一段可发生重组和交换的DNA碱基序列，其特征在于，所述的方法包括：(1)引物设计：将15-50bp的重组位点attB1的特异序列和目的基因序列的反义链、15-50bp的重组位点attB2的特异序列和目的基因序列的正义链设计成一组PCR引物，然后利用带要λ噬菌体的重组位点(attP)元件的质粒载体，进行体外重组克隆；(2)所述的重组克隆元件由attB、attP以及它们重组产生的attL和attR特异位点成对组成，将成对的重组克隆元件装在农杆菌的Ti或Ri质粒的T-DNA序列上，通过B×P和L×R位点之间的重组与交换，获得反向构建的位点特异重组转化载体，并用于遗传转化；(2) 通过将重组克隆元件连接在PVX、TRV病毒的核酸载体上，获得反向构建的位点特异重组载体，用于人工接种感染植物；(4)结合PVX和T-DNA的重组克隆元件方法，将连接有重组元件的PVX或TRV一类的病毒载体再连接到如Ti或Ri质粒的转化载体T-DNA上，即可进行稳定的遗传转化和/或可进行感染； |
