将外源遗传物质高效导入活细胞的方法

摘要

本发明涉及一种向植物组织、器官或细胞中导入外源遗传物质的方法。具体地说是将活细胞、组织块或器官在高渗培养液中处理一段时间，再放到含外源遗传物质的普通培养液中，然后用微束激光进行穿刺。外源遗传物质立即从穿刺小孔进入细胞，小孔约3秒钟自然闭合。本发明的方法所适用的转化受体广泛，不受种属及基因型的限制；对细胞的损伤小，而且适当剂量的激光有刺激生长作用；可以准确地定位于细胞或细胞器，并且通过监视器可直接观察打孔部位；操作简便、重复性好。

主权项

1、一种向植物组织、器官或细胞中导入外源遗传物质的方法，包括：将植物组织、器官或细胞在高渗液中浸泡至质壁分离，其中，高渗液的渗透压在0.3-1mol/L之间，并且是在适合植物生长的培养基中使用选自蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、果糖、甘露醇、山梨醇、和果聚糖的糖醇类分子，选自包括脯氨酸和羟脯氨的氨基酸类，激素类，如脱落酸(ABA)以及它们的混合物配制的；将上述处理后的植物的组织、器官或细胞取出，除去其表面的高渗液，再放到含有外源遗传物质的普通培养液中，然后用激光脉冲打孔的方法使细胞壁快速穿孔，使外源遗传物质立即从孔洞进入细胞，其中，所述的含有外源遗传物质的培养基中外源物质的浓度为0.01μg/μl至1μg/μl，激光脉冲单位时间的脉冲数为60次-104次/分钟；将处理的细胞、组织或器官转入筛选培养基中使细胞再生，得到转化的植株。