主权项 |
1.枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶变体,其特征在于所述变体具有野生型氨基酸序列的修饰的氨基酸序列,所述野生型序列包含第一个表位区和第二个表位区,所述修饰的氨基酸序列包含在一个或多个表位区内一个或多个位置处的取代氨基酸的取代,其中:(a) 当取代发生在第一个表位区中时,所述取代发生在108,109,110,111,112,113,114,115,116,117,118,119,120,121,122,123,124,125和126位的一个或多个位置处,其中:(i) 当取代发生在108位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Trp和Tyr;(ii) 当取代发生在109位时,取代氨基酸选自Phe,Gly,His,Leu,Met,Pro,Gln,Trp和Tyr;(iii) 当取代发生在 110位时,取代氨基酸选自Ala,Asp,Glu,Phe,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(iv) 当取代发生在111位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(v) 当取代发生在112位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Val,Trp和Tyr;(vi) 当取代发生在113位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val和Tyr;(vii) 当取代发生在114位时,取代氨基酸选自Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(viii) 当取代发生在115位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(ix) 当取代发生在116位时,取代氨基酸选自Cys,Asp,Phe,Gly,His,Ile,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Ser,Val,Trp和Tyr;(x) 当取代发生在117位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Leu,Met,Pro,Gln,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xi) 当取代发生在118位时,取代氨基酸选自Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Lys,Met,Gln,Arg,Thr,Trp和Tyr;(xii) 当取代发生在119位时,取代氨基酸选自Ala,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xiii) 当取代发生在120位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Glu,Phe,Gly,Ile,Leu,Met,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xiv) 当取代发生在121位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Trp和Tyr;(xv) 当取代发生在122位时,取代氨基酸选自Ala,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xvi) 当取代发生在123位时,取代氨基酸选自Asp,Glu,Phe,His,Lys,Leu,Met,Pro,Gln,Arg,Val,Trp和Tyr;(xvii) 当取代发生在124位时,取代氨基酸选自Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xviii) 当取代发生在125位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Thr,Val,Trp和Tyr;和(xix) 当取代发生在126位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Lys,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;和(b)当取代发生在第二个表位区中时,所述取代发生在221,223,224,225,226,227,228,229,230,231,232,233,234,235,236,237,238,239,240,241,242,243,244,245和246位的一个或多个位置处,其中:(i) 当取代发生在221位时,取代氨基酸选自Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Thr,Val,Trp和Tyr;(ii) 当取代发生在223位时,取代氨基酸选自Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(iii) 当取代发生在224位时,取代氨基酸选自Ala,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Val,Trp和Tyr;(iv) 当取代发生在225位时,取代氨基酸选自Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Asn,Thr,Trp和Tyr;(v) 当取代发生在226位时,取代氨基酸选自Ala,Asp,Glu,Phe,Gly,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Thr,Val,Trp和Tyr;(vi) 当取代发生在227位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Trp和Tyr;(vii) 当取代发生在228位时,取代氨基酸选自Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(viii) 当取代发生在229位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(ix) 当取代发生在230位时,取代氨基酸选自Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(x) 当取代发生在231位时,取代氨基酸选自Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xi) 当取代发生在232位时,取代氨基酸选自Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xii) 当取代发生在233位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xiii) 当取代发生在234位时,取代氨基酸选自Ala,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xiv) 当取代发生在235位时,取代氨基酸选自Ala,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Met,Asn,Pro,Gln,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xv) 当取代发生在236位时,取代氨基酸选自Ala,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Thr,Val,Trp和Tyr;(xvi) 当取代发生在237位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xvii) 当取代发生在238位时,取代氨基酸选自Ala,Asp,Glu,Phe,Gly,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xviii) 当取代发生在239位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xix) 当取代发生在240位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Leu,Met,Pro,Gln,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xx) 当取代发生在241位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Met,Asn,Gln,Arg,Ser,Thr和Val;(xxi) 当取代发生在242位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Gln,Arg,Ser,Val,Trp和Tyr;(xxii) 当取代发生在243位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;(xxiii) 当取代发生在244位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Val,Trp和Tyr;(xxiv) 当取代发生在245位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Arg,Ser,Thr,Val,Trp和Tyr;和(xxv) 当取代发生在246位时,取代氨基酸选自Ala,Cys,Asp,Glu,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Thr,Trp和Tyr。 |