丝状真菌中DNA表达文库的高通量筛选

摘要

本发明提供了一种在丝状真菌中表达外源基因DNA文库的方法。该真菌可以处理有内含子的真核基因,并且也可以进行诸如糖基化、蛋白质折叠的翻译后加工。本发明提供了形态学改变的真菌的用途,其允许高通量筛选和对表达蛋白直接改造。所述转化的真菌可以用于生产大量的蛋白质,用来进行蛋白质的分离、测定和应用测试,也许还适合于蛋白质的商业化生产。

主权项

1.一种表达由一组DNA载体库编码的多种蛋白质的方法，其中载体库包括多种不同的载体，每种载体都包含一种不同的编码蛋白质的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接于一种表达调控区和任选连接一种分泌信号编码序列，所述方法包括以下步骤：(a)提供一种具有悬浮生长表型特征的丝状真菌株，并且具有在悬浮条件下产生可转移性复制单元的特征；(b)使用上述DNA载体库稳定转化上述丝状真菌株，使每个单一菌株都至少含有一种编码外源蛋白的核酸序列；(c)将转化的丝状真菌突变株在有利于形成可转移性复制单元的悬浮培养条件下培养；(d)将各种不同的可转移性复制单元相互分离；和(e)在有利于外源蛋白编码核酸序列表达外源蛋白的条件下，培养成单个可转移性复制单元的单克隆培养物或单克隆。