一种荧光定量聚合酶链式反应方法及其试剂盒

摘要

本发明提供了一种荧光定量PCR方法。该方法的荧光PCR反应体系中镁离子的浓度为15-20mM，Taq酶用量为8-10单位/反应；在PCR反应前测定反应前荧光值；在PCR反应后测得反应后荧光值；计算出差值。同时用系列阳性和阴性模板也进行同样的步骤，制成标准曲线；用各样品的荧光增值即可在标准曲线上查出相应的样品中的核酸起始拷贝数。本发明还提供了一种用于该方法的试剂盒。

主权项

1、一种荧光定量聚合酶链式反应方法，包括以下步骤：a、根据待检测靶基因的特异性核酸序列合成一对引物；b、根据待检测靶基因的特异性核酸序列中位于两个引物之间的序列设计、合成一个荧光探针；c、使用步骤a中的引物和步骤b中的荧光探针及其它聚合酶链式反应成份组成荧光聚合酶链式反应体系，其中镁离子的浓度为15-20mM，Taq酶用量为8-10单位/反应；d、从待测标本中提取DNA，或是提取RNA然后逆转录成cDNA，加入步骤c中的反应体系中，经离心混合后测定反应前荧光值；e、将反应管放入聚合酶链式反应仪进行20～50次循环的聚合酶链式反应；反应结束后再测定一次反应管中的荧光值；前后两次测值的差值即代表了本管反应的荧光增值；f、同时用系列阳性和阴性模板也进行步骤d的核酸提取和聚合酶链式反应，测得各自相应的荧光增值，将荧光增值相对于阳性模板的初始核酸量的自然对数值作图，制成标准曲线；g、用上述e步骤中获得的各样品的荧光增值，可在标准曲线上查出相应的样品中的核酸起始拷贝数。