一种生物杀虫剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种对农业害虫的高效、无毒、安全以及对环境无污染的微生物农药杀虫剂的制备方法,首先对斜面保藏蜡状芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌,斜面活化培养至芽孢脱落;其次是热处理;第三是分别接种;第四是摇瓶发酵培养至芽孢脱落;第五是拮抗菌的剔除;第六是混合发酵;第七是接种时间和比例选择;最后是培养至15－20%芽孢脱落。本发明节约了时间,成本低廉,增效效果大,提高了苏云金芽孢杆菌Bt产品的杀虫效果。

主权项

1、一种生物杀虫剂的制备方法，采用苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis，Bt与蜡状芽孢杆菌Billus cereus，Bc混合发酵，包括下列步骤：A、增效菌的筛选，将对苏云金芽孢杆菌Bt和蜡状芽孢杆菌Bc分别接种于发酵培养基进行发酵培养，将发酵培养液以1∶1-8∶1的比例混合后进行生物测定，筛选对苏云金芽孢杆菌Bt有增效作用的蜡状芽孢杆菌Bc菌株；发酵方法首先是活化，将蜡状芽孢杆菌Bc接种于LB斜面上，30℃培养至芽孢脱落；其次是同步化：从活化的LB斜面或平板上刮取一环菌，加入装有5ml蒸馏水的试管中摇匀，温度控制在72～76℃，水浴12～15分钟，取出冷却至常温；第三是摇瓶发酵：取上述同步化的菌悬液接种于瓶中，摇瓶培养，至15～20％芽孢脱落；B、同活性苏云金芽孢杆菌Bt的拮抗的菌株的剔除，在制备LB平板的过程中加入苏云金芽孢杆菌Bt的芽孢，得到含苏云金芽孢杆菌的平板，然后将蜡状芽孢杆菌Bc菌株，接种于上，30℃培养；C、混合发酵条件，首先是接种比例：将苏云金芽孢杆菌Bt与蜡状芽孢杆菌Bc按1∶1～8∶1接种于摇瓶培养基中，30℃，200rpm摇瓶培养；其次是接种时间：先接苏云金芽孢杆菌Bt菌株于培养基中，摇瓶培养0-8小时后，再接种蜡状芽孢杆菌Bc菌株，培养40-52小时后，选取两菌株接种间隔时间0-6小时；D、混合发酵，将苏云金芽孢杆菌Bt和蜡状芽孢杆菌Bc按照步骤A进行同步化，按步骤C接种时间和比例接种到摇瓶培养基中发酵培养，以芽孢脱落15～20％为发酵终点，得到的培养物即为混合发酵产物。