METODO PARA IDENTIFICAR LIGANDOS DE RECEPTORES DE PROGESTERONA ESPECIFICOS PARA ISOFORMAS Y LIGANDOS DE RECEPTORES DE PROGESTERONA SELECTIVOS PARA TEJIDOS

摘要

SE REFIERE A UN METODO PARA IDENTIFICAR LIGANDOS ESPECIFICOS DE LA ISOFORMA DEL RECEPTOR DE PROGESTERONA A O B (PR) QUE COMPRENDE: a)TRANSFECTAR EN FORMA ESTABLE UN GRUPO 1 DE CELULAS COMO CELULAS DEL NEUROBLASTOMA HUMANO CON UN PLASMIDO TAL COMO PROMOTOR DEL VIRUS DE TUMOR MAMARIO DEL RATON QUE EXPRESA LA ISOFORMA DEL RECEPTOR DE PR A; b)TRANSFECTAR EN FORMA ESTABLE UN GRUPO 2 DE CELULAS CON UN PLASMIDO QUE EXPRESA LA ISOFORMA DEL RECEPTOR DE PR B; c)TRANSFECTAR LOS GRUPOS 1 Y 2 DE CELULAS CON UN PLASMIDO QUE COMPRENDE UN GEN INFORMANTE TAL COMO EL GEN DE LUCIFERASA, CONECTADO CON UN PROMOTOR QUE RESPONDE A HORMONAS; d)PONER EN CONTACTO LOS GRUPOS 1 Y 2 DE CELULAS CON UN LIGANDO A EVALUAR; e)DETERMINAR LA EFICACIA DE LA TRANSCRIPCION O POTENCIA DEL GEN INFORMANTE EN LOS GRUPOS 1 Y 2 DE CELULAS; f)SELECCIONAR UN LIGANDO QUE TIENE UNA SELECTIVIDAD POR LA ISOFORMA DEL RECEPTOR DE PR A O B; LA DIFERENCIA EN LA EFICACIA DE LA TRANSCRIPCION ES MAYOR O IGUAL A 10% Y LA DIFERENCIA DE LA POTENCIA ES DE 10, QUE SE DETERMINA MIDIENDO LA ACTIVIDAD DE LA LUCIFERASA; LOS PLASMIDOS Y EL GEN COMPRENDEN UN ADEMAS UN GEN DE RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS TAL COMO NEOMICINA O PUROMICINA. TAMBIEN SE REFIERE A UN METODO PARA IDENTIFICAR LIGANDOS DE RECEPTORES DE PR SELECTIVOS PARA TEJIDOS QUE COMPRENDE ADEMAS g)SOMETER EL LIGANDO SELECCIONADO A PRUEBAS IN VIVO EN UN PRIMER TEJIDO (DE MAMA) Y EN UN SEGUNDO TEJIDO (DE UTERO) BLANCO, h)SELECCIONAR EL LIGANDO QUE TIENE LA ACTIVIDAD DESEADA