俘获测定法

摘要

本发明提供了一种测定样品中微生物和/或其细胞内物质的存在和/或含量的方法，其特征在于：(a)将样品暴露于已固定化在一种固体基质上的特异性结合剂，这种特异性结合剂具有结合微生物或其细胞物质的能力，这样就使它与这种固体基质相结合，(b)将这种固体基质暴露于一种能够使腺苷酸激酶与微生物和/或其细胞内物质相关联的试剂，并且这些微生物和/或其细胞内物质是经处理易于与施加于该基质的溶液相作用的，(c)将含有二磷酸腺苷(ADP)的溶液在某种条件下施加于这种基质，在这种条件下，存在的任何腺苷酸激酶都能参与产生三磷酸腺苷(ATP)，以及(d)测定三磷酸腺苷(ATP)的量，并使之与微生物或其细胞内物质的存在和/或含量相关联。步骤(d)可以借助于包括生色反应的测定法来实现，但是，优选的是通过使用虫荧光素酶/虫荧光素试剂来实现，其发光与ATP的产量成正比，并且可以用光度计测定。优选的步骤(c)包括镁离子的存在，其浓度足以允许从ADP到ATP有最大的转化率。最优选的实施步骤(b)和(c)的方法是对样品加入提取剂、ADP和镁离子，并将此混合物温育一个预定的时间，以使ADP有效地转化成ATP。

主权项

1.一种测定样品中微生物和/或其细胞内物质的存在和/或含量的方法，其特征在于它包括：(a)将样品暴露于一种固定化在固体基质上的俘获剂，该俘获剂能够与微生物或其细胞内物质相结合，从而使微生物或其细胞内物质与固体基质相关联，(b)将固体基质暴露于能够使腺苷酸激酶与微生物和/或其细胞内物质相关联的试剂，这些微生物和/或其细胞内物质是易于与施加于基质上的溶液相作用的，(c)将含有二磷酸腺苷(ADP)的溶液施加于基质，所用的条件使存在的任何腺苷酸激酶都能产生三磷酸腺苷(ATP)，(d)测定产生的三磷酸腺苷(ATP)的量，并使之与微生物或细胞内含物的存在和/或含量相关。