快速检测海藻施万氏菌的试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供一种快速检测海藻施万氏菌的试剂盒,试剂包括:(a)DNA提取试剂:含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B,(b)PCR反应试剂:包括反应预混试剂C和反应引物试剂D,试剂C含有10倍PCR反应缓冲液、热聚合酶和灭菌双蒸水,试剂D:包括特异引物VP₀₃,特指5‘^－agccgcaagagcctatcaagga;VP₀₄特指5‘^-atccttattcaccggagtcttg、dNTP及MgCl₂,(c)电泳和显色试剂。本发明还提供一种使用这种试剂盒快速测检海藻施万氏菌的方法,其优点是快速、准确。

主权项

1.一种快速检测海藻施万氏菌的试剂盒，其特征是试剂包括：(a)DNA提取试剂：含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B，试剂A含有NaCl、三羟基甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸和曲拉通X-100，它们的浓度分别为：0.1-0.3M、1-100mM pH8.0、0.1-10mM pH8.0和0-20％；试剂B含有溶菌酶和三羟基甲基氨基甲烷，浓度分别为1-10mg/ml和1-100mMpH8.0；(b)PCR反应试剂：包括反应预混试剂C和反应引物试剂D，试剂C含有10倍PCR反应缓冲液、热聚合酶和灭菌双蒸水，含量分别为2.5-5.0μl、0.5-2.5个单位和18-35.5μl；试剂D：包括特异引物对VP03和VP04、dNTP及MgCl2，含量分别为0.2-3μM和0.2-3μM、20-200μM及0.5-10mM；特异引物VP03特指5‘-agccgcaagagcctatcaagga；VP04特指5‘-atccttattcaccggagtcttg；(c)电泳和显色试剂，包括试剂E和试剂F，试剂E：为50倍电泳缓冲液，含三羟基甲基氨基甲烷-乙酸和乙二胺四乙酸，浓度分别为0.04M和0.001M；试剂F：0.8-2％琼脂糖和0.5-20μg/ml溴乙锭。