| 主权项 |
1.一种靶核酸之侦测方法,该方法包含下述步骤:在一不可做为聚合引子之寡核酸的存在下,利用一聚合,一带或不带有一段非接触于一第一引子的序列之第一引子,和一带或不带有一段非接触于一第二引子的序列之第二引子来扩大靶核酸以得到扩大产物,其中该寡核酸,有至少五个连续的核酸与第一引子之至少五个连续核酸完全互补;和藉由追踪该扩大反应以检测靶核酸之存在。2.如申请专利范围第1项之方法,其中该检测步骤之实行系藉由追踪电泳胶体之靶核酸之扩大产物。3.如申请专利范围第1项之方法,其中两个萤光体分别和该第一引子及寡核酸共价结合,该两个萤光体中之一为供给萤光体,另一为接收萤光体,因此当该第一引子和该寡核酸杂交时,该供给萤光体与该接收萤光体彼此接近到可以使共振能量互相转移;而检测步骤之实行就是追踪以一激发的光使该供给萤光体发光而造成该接收体的萤光发射变化,该变化与第一引子自寡核酸分离出来及结合于该靶核酸扩大产物的程度成函数关系。4.如申请专利范围第1项之方法,其中该第一引子包含非接触于第一引子序列的片段。5.如申请专利范围第4项之方法,其中寡核酸有至少有5个连续核酸和第一引子非接触片段的至少5个连续核酸完全互补。6.如申请专利范围第1项之方法,其中该第一引子不含非接触于第一引子序的列段。7.如申请专利范围第1项之方法,其中该扩大步骤之实行系在一不可做为聚合引子之额外的寡核酸的存在下,其中该额外的寡核酸有至少5个连续核酸和第二引子的至少5个连续核酸完全互补。8.如申请专利范围第1项之方法,其中第一引子,第二引子及寡核酸各含有10至50个核酸。9.如申请专利范围第1项之方法,其中第一引子、第二引子及寡核酸各含有15至40个核酸。10.如申请专利范围第1项之方法,其中寡核酸有至少8个连续核酸和第一引子的至少8个连续核酸完全互补。11.如申请专利范围第1项之方法,其中寡核酸浓度是第一引子的0.3至5.0倍。12.如申请专利范围第11项之方法,其中寡核酸的浓度是第一引子的0.5至2.5倍。13.如申请专利范围第12项之方法,其中第一引子、第二引子和寡核酸各含10至50个核酸。14.如申请专利范围第12项之方法,其中寡核酸至少有8个连续的核酸和第一引子的至少8个连续的核酸完全互补。15.如申请专利范围第13项之方法,其中寡核酸至少有8个连续的核酸和第一引子的至少8个连续的核酸完全互补。16.如申请专利范围第15项之方法,其中两个萤光体分别和该第一引子及寡核酸共价结合,该两个萤光体中之一为供给萤光体,另一为接收萤光体,因此当该第一引子和该寡核酸杂交时,该供给萤光体与该接萤光体彼此接近到可以使共振能量互相转移;而检测步骤之实行就是追踪以一激发的光使该供给萤光体发光而造成该接收体的萤光发射变化,该变化与第一引子自寡核酸分离出来及结合于该靶核酸扩大产物的程度成函数关系。17.一种检测靶核酸的套组,包含:一带或不带有非接触于第一引子序列的片段之第一引子,及一带或不带有非接触于第二引子序列的片段之第二引子,该第一和第二引子系和聚合一起用来进行靶核酸的扩大;以及一个无法做为聚合引子的寡核酸,其具有至少5个连续的核酸和第一引子的至少5个连续核酸完全互补;其中该第一引子,该第二引子和该寡核酸各含有10至50个核酸。18.如申请专利范围第17项之套组,其中所供应的该第一引子和该寡核酸是为双倍体。19.如申请专利范围第17项之套组,其中该寡核酸有至少8个连续核酸和该第一引子的至少8个连续核酸完全互补。20.如申请专利范围第19项之套组,其中该第一引子,该第二引子和该寡核酸各含有15至40个核酸。21.如申请专利范围第19项之套组,更包含一聚合。22.如申请专利范围第19项之套组,更包含一不可做为该聚合引子额外的寡核酸,其包含10至50个核酸,而且有至少8个连续核酸,和该第二引子的至少8个连续核酸完全互补。23.如申请专利范围第19项之套组,其中两个萤光体分别与该第一引子及该寡核酸共价结合,该两个萤光体中之一为供给萤光体,另一为接收萤光体,因此当该第一引子和该寡核酸杂交时,该供给萤光体与该接收萤光体彼此接近到可以使共振能量互相转移。24.一种检测靶核酸之套组,包含:一第一寡核酸其含有10至50个核酸,以共价键方式和第一萤光体接合,该第一寡核酸在靶核酸的扩大过程中无法做为聚合的引子;和一第二寡核酸其含有5至30个核酸并以共价键方式和第二萤光体接合,该第二寡核酸有一自由的3'OH基,并透过至少5个连续完全互补的核酸配对而和该第一寡核酸杂交;其中该第一寡核酸藉1-12个核酸悬挂于该第二寡核酸的3'端,更且该第一和第二萤光体,其中一个是供给萤光体,另一则为接收萤光体,彼此接近到可以使共振能量之转移。25.如申请专利范围第24项之套组,其中该第一寡核酸含15至40个核酸,并藉4-8个核酸而悬挂于该第二寡核酸之3'端,该第二寡核酸含7至15个核酸,并且透过至少8个连续完全互补的核酸配对和该第一寡核酸混合。26.如申请专利范围第25项之套组,其中该第一和第二寡核酸,是以双倍体方式供应。27.如申请专利范围第25项之套组,更包含一结合。28.如申请专利范围第25项之套组,更包含一激或一具有5'→3'外核酸酵素活性之聚合。29.如申请专利范围第27项之套组,包含一激或一具有5'→3'外核酸酵素活性之聚合。30.如申请专利范围第25项之套组,更包含一带或不带有5'→3'外核酸酵素活性之聚合。31.一去氧核醣核酸双倍体(DNA duplex),包含:一可以做为引子之第一寡核酸,带或不带有非接触于其引子之片段,其可供与聚合一起用于靶核酸之扩大;一第二寡核酸,其藉由至少5个连续完全互补之核酸配对,而与该第一寡核酸杂交,该第二寡核酸不可做为该聚合之引子;以及一供给萤光体和一接收萤光体分别与该二个寡核酸共价结合,该二萤光体彼此接近到以使共振能量相互转移;其中该第一寡核酸及该第二寡核酸各含有10-50个核酸。32.如申请专利范围第31项之去氧核醣核酸双倍体,其中该第一寡核酸及该第二寡核酸各含有15-40个核酸,且该第二寡核酸藉由至少8个连续互补的核酸配对而与该第一寡核酸杂交。33.一种检测靶核酸之组成物,包括:一第一单股寡核酸含有15-50个核酸,该寡核酸与聚合一起用于靶核酸之扩大时不可做为引子;一第一萤光体共价的结合于该寡核酸;一第二单股寡核酸,含有5-30个核酸和一自由的3'OH,该第二寡核酸藉由至少5个连续完全互补的核酸配对而与该第一核酸杂交,该第一寡核酸并藉1-12个核酸悬挂于该第二寡核酸之3'端;以及一第二萤光体共价结合于该第二寡核酸,该第一和第二萤光体,其中之一为供给萤光体,而另一为接收萤光体,彼此接近到可以共振能互相转移。34.如申请专利范围第33项之组成物,其中该第一寡核酸含有15-40个核酸,且藉由4-8个核酸悬挂于该第二寡核酸之3'端,且该第二个核酸藉由至少8个连续完全互补的核酸配对而与该第一寡核酸杂交。图式简单说明:第一图:本发明的具体方法示意图。第二图:本发明的另一具体方法示意图。第三图:凝胶的照片,显示一封锁式寡核酸对于减少非特异性引子事件之影响。第四图:表示利用萤光标示的封锁式寡核酸来追踪特异性引子事件之图表。第五图:表示利用本发明的二个探针,来检测两个不同的靶序列其解析度及灵敏性之图表。 |
