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1.一种根据野生型人类IL-4编号之高亲和力IL-4突变 蛋白,其特征在于该突变蛋白在该野生型人类IL-4 的A-或C-螺旋链的结合表面上包含了至少一个胺 基酸取代,从而使该突变蛋白以至少比天然IL-4更 高的亲和力与IL-4R受体结合,其中该取代选自包 含A-螺旋链上位置13与16及C-螺旋链上位置81与89之 位置且该选定之位置上之该取代选自下列表中:2. 一种用作IL-4拮抗剂或作用剂之医药组合物,其包 含如申请专利范围第1项之高亲和力IL-4突变蛋白 与药学容许载体。3.一种胺基酸序列,其编码如申 请专利范围第1项之高亲和力IL-4突变蛋白且具有 下述序列: ;其中B为胺基酸D;J为选自包含A,D,H,I,L,Q,R,T,V及Y之 胺基酸;X为胺基酸K;及Z为胺基酸I。4.如申请专利 范围第1项之高亲和力IL-4突变蛋白,其由胺基酸序 列SEQ ID NO:8编码:5.一种经纯化且单离的聚核酸 酸序列,其编码具有下列胺基酸序列之如申请专利 范围第1项之高亲和力IL-4突变蛋白: ;其中B为胺基酸D;J为选自包含A,D,H,I,L,Q,R,T,V及Y之 胺基酸;X为胺基酸K;及Z为胺基酸I。6.如申请专利 范围第1项之高亲和力IL-4突变蛋白,其由DNA序列SEQ ID NO:9编码:7.一种根据野生型人类IL-4编号的高亲 和力IL-4拮抗剂突变蛋白,其特征在于该突变蛋白 包括: (a)在该野生型人类IL-4的D-螺旋上具有R121D和Y124D之 取代;和 (b)在该野生型人类IL-4的A-或C-螺旋链之结合表 面上具有至少一个胺基酸取代,从而该突变蛋白以 至少比天然IL-4更高的亲和力与IL-4R受体结合,其 中该取代选自包含A-螺旋链上位置13与16及C-螺旋 链上位置81与89之位置;该选定之位置上之该取代 选自下列表中:8.一种用作IL-4拮抗剂之医药组合物 ,其包含如申请专利范围第7项的高亲和力IL-4拮抗 剂突变蛋白与药学容许载体。9.一种胺基酸序列, 其编码如申请专利范围第7项的高亲和力IL-4拮抗 剂突变蛋白且具有下述序列:10.一种经纯化且单离 的聚核酸序列,编码具有下列胺基酸序列之如申 请专利范围第7项的高亲和力TL-4拮抗剂突变蛋白: 11.如申请专利范围第9项之胺基酸序列,其由下述 DNA序列编码:图式简单说明: 图1为IL-4配位体/受体结构的示意图。IL-4是一种四 螺旋束蛋白,四个螺旋在此以端视图示出(A、B、C 和D,分别自N-末端至C-末端)。IL-4受体的主要结合 组份为IL-4R,它透过IL-4的A-和C-螺旋与IL-4配位体 发生作用。三元复合物IL-4/IL-4R/IL-4R-的形成 在标的细胞中诱发信号。 图2为T13D-IL-4[R121D/Y124D]竞争性结合的X-Y曲线图。 图中示出了T13D-IL-4[R121D/Y124D]""在固相结合测定 中相对于IL-4[Rl21D/Y124D]"。"之与125I-IL-4竞争的能力 。用本测定方法取得的T13D-IL-4[R121D/Y124D]的Kd为0.28 nM,IL-4[Rl21D/Y124D]的Kd为5.0nM。 图3为类似的X-Y曲线图,它描绘了由T13D-IL-4[R121D/Y124 D]"。"产生的IL-4的拮抗性。图中示出了T13D-IL-4[R121 D/Y124D]相对于IL-4[Rl21D/Y124D]""之IL-4诱发PHA母细胞 增殖的竞争能力。用本测定方法取得的T13D-IL-4[R 121D/Y124D]的IC50为2nM,IL-4[Rl21D/Y124D]的IC50为13nM。 图4为sIL-4R-STX的胺基酸序列表。 图5为T13D-IL-4突变蛋白的组成序列表。 图6为T13D-IL-4[R121D/Y124D]突变蛋白的组成序列表。 |
