一种蚯蚓抗菌肽的制取方法

摘要

本发明公开了一种蚯蚓抗菌肽的制取方法,属生物技术领域。技术方案包括:通过将蚯蚓体自身水解酶分解成的蚯蚓提取液离心分离,入沸水浴,超滤等步骤得到蚯蚓抗菌肽粗提液;然后将粗提液通过分子筛柱层析、离子交换柱层析、脱盐等步骤进行纯化而得到蚯蚓抗菌肽。本发明具有原材料(蚯蚓)来源广泛、制取方法简单,产品纯度高等优点。

主权项

1、一种蚯蚓抗菌肽的制取方法包括下列步骤：1)蚯蚓抗菌肽粗提液的制备将活蚯蚓用水洗净，并浸泡清肠，把洗净的蚯蚓沥干、绞碎后加入1/5-1/4体积乙酸或磷酸溶液，在35-45℃温度下，蚯蚓体被自身水解酶分解成蚯蚓提取液；将蚯蚓液离心分离，取上清液，用乙酸缓冲液稀释后，入沸水浴，边加热边搅动5-15分钟，然后离心分离，取上清液，用乙酸缓冲液稀释后，用能通过分子量10000Da规格的超滤系统过滤或高速离心机分离得蚯蚓抗菌肽粗提液；2)蚯蚓抗菌肽的分离纯化(1)分子筛柱层析添料：Sephadex G-25；上样：蚯蚓抗菌肽粗提液；洗脱液：0.033M乙酸，pH3-3.5；UV254nm检测，按吸收峰收集；将收集的溶液进行低温真空干燥得蚯蚓抗菌肽的活性峰干粉；(2)离子交换柱层析添料：DEAE纤维素DE52；平衡液：0.005MTris-HCl，pH7-8.5；梯度洗脱；上样：SephadexG-25柱层析，将冷冻干燥的蚯蚓抗菌肽活性峰干粉，加平衡液及乙醇溶解后上样；(3)脱盐添料：Sephadex G-10’；洗脱液：0.033M乙酸，pH3-3.5；检测波长：254nm；上样：离子交换柱层析的活性峰干粉加洗脱液溶解。