膜内在蛋白质的抽提

摘要

描述了采用不同去污剂切向流渗滤,从细菌或含有重组载体的细菌宿主细胞中抽提得到革兰阴性菌膜内在蛋白质的方法。该方法与其它方法相比有一些优点。首先,本发明将澄清和抽提过程合并在一项操作中。从细胞中抽提产物,接着仅采用一连续渗滤过程将其与细胞碎片分开。其次,膜蛋白质以半纯化状态被抽提,这简化了下游的加工步骤。第三,本发明基于规模化,因为所要求的仅仅是膜的表面积随着细胞的数量成比例地增加。

主权项

1.一种通过不同去污剂切向流渗滤，从细菌或含有重组载体的细菌宿主细胞中抽提得到天然或重组表达的革兰阴性菌内膜蛋白质的方法，其特征在于，该方法包括：(a)裂解发酵培养液中的细菌或含有重组载体的细菌宿主细胞；(b)用不被渗滤膜保留的缓冲液渗滤从(a)得到的裂解发酵培养液，其中，所述缓冲液通过渗透去除了胞内和胞外性污染物，并用螯合剂防止蛋白质水解；(c)用去污剂和不被渗滤膜保留的缓冲液渗滤从(b)得到的裂解产物，其中，所述去污剂溶解并取出内膜蛋白质，并使用二价阳离子稳定外膜蛋白质，防止它们溶解；和(d)收集(c)步取得的内膜蛋白质。