发明名称 用于将麦芽糖转化为海藻糖之重组型对热安定的酵素,编码该酵素之DNA及其用途
摘要 发现一种可将麦芽糖转化为海藻糖的重组型对热安定酵素,在pH7.0下静置反应60分钟,温度上达约80℃仍然安定,一种酵素的制备方法,一种编码此酵素之DNA,一种含有此DNA之重组型DNA,一种转形体,以及一种藉酵素转化麦芽糖的酵素转化方法。
申请公布号 TW493000 申请公布日期 2002.07.01
申请号 TW084110496 申请日期 1995.10.05
申请人 林原生物化学研究所股份有限公司 发明人 津 桂二;久保田伦夫;杉本利行
分类号 C12N1/21;C12N15/56;C12N9/24 主分类号 C12N1/21
代理机构 代理人 林志刚 台北巿南京东路二段一二五号七楼
主权项 1.一种重组型酵素,其能将麦芽糖转化成海藻糖,并 且于不超过55℃之温度下静置反应却实质上不被 去活化,该酵素具有SEQ ID NO:3所示之胺基酸序列2. 如申请专利范围第1项之重组型酵素,其具有如下 之理化性质: (1)作用 作用于麦芽糖时,形成海藻糖,且作用于海藻糖时, 形成麦芽糖; (2)单元体分子量(MW) 以十二烷硫酸钠聚丙烯醯胺胶体电泳分析(SDS-PAGE) 得其分子量约100,000-110,000道耳吞; (3)等电点(pI) 以等电电泳分析得其等电点约3.8- 4.8; (4)最适温度 在pH7.0下静置反应60分钟,其最适温度约65℃; (5)最适pH 在60℃下静置反应60分钟,其最适pH约6.0-6.7; (6)对热安定性 于pH7.0下静置反应60分钟,其温度升高至80℃仍然安 定;及 (7)pH安定性 于60℃下静置反应60分钟,其pH在5.5-9.5之间仍然安 定。3.一种编码如申请专利范围第1项之重组型酵 素的DNA。4.如申请专利范围第3项的DNA,其具有选自 下列之硷基序列,包括SEQ ID NO:4所示硷基序列,及其 互补硷基序列:5.如申请专利范围第4项的DNA,其中 SEQ ID NO:4中一或多个硷基藉着基因密码的简并性 以其他硷基取代,但不改变SEQ ID NO:3的胺基酸序列 。6.如申请专利范围第3项的DNA,其具有SEQ ID NO:5的 硷基序列:7.如申请专利范围第3项之DNA,其系源自 Thermus属微生物。8.一种藉酵素将麦芽糖转化为海 藻糖之方法,它包含以如申请专利范围第1项之重 组型酵素作用于麦芽糖以形成海藻糖之步骤。9. 如申请专利范围第8项的方法,其中该步骤包含在 胶体培养基中同时含有最多50w/w%之麦芽糖及有效 量的重组型酵素,并且将所得之混合物在不超过55 ℃之温度及pH5-10之条件下进行酵素反应。10.如申 请专利范围第8项的方法,其中所生成之反应物含 有至少约50w/w%之海藻糖(按乾固重计)。图式简单 说明: 图1表示由Thermus aquaticus (ATCC 33923)制得酵素之最适 温度。 图2表示由Thermus aquaticus (ATCC 33923)制得酵素之最适 pH値。 图3表示由Thermus aquaticus (ATCC 33923)制得酵素之对热 安定性。 图4表示由Thermus aquaticus (ATCC 33923)制得酵素之对pH 値安定性。 图5表示得自本发明之重组型DNA PBTM22结构。 图6表示得自本发明之重组型DNA PBTM23结构。
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