用气单胞菌氨肽酶由多肽除去N末端丙氨酸残基的方法

摘要

本发明描述了使用由海洋细菌解蛋白气单胞菌衍生的氨肽酶,由多肽(优选重组蛋白质)除去N末端丙氨酸残基的方法。因此,气单胞菌氨肽酶(AAP;E.C.3.4.11.10)可以用于(例如)由人生长激素(hST或hGH)、猪生长激素(pST)、和牛生长激素(bST)的衍生物除去N末端丙氨酰基残基,从而产生具有其天然氨基酸序列的蛋白质。可以在自由的溶液中进行酶反应,或者可以将AAP固定在固相支持物上,用于在体外进行反应。用于(例如)将Ala－hGH转变成hGH的有效方法包括:在大肠杆菌中表达Ala－hGH,回收包涵体,在去污剂中溶解并重新折叠,通过超滤除去去污剂,选择性沉淀,酶切割,然后进行两个柱层析步骤。

主权项

1.由重组蛋白质除去N末端丙氨酰基的方法，包括使所述重组蛋白质接触气单胞菌氨肽酶从而除去N末端丙氨酰基，并回收产生的重组蛋白质。