酶法生产右旋糖酐

摘要

酶法生产右旋糖酐,分两大步。第一大步,首先生产右旋糖酐蔗糖酶又分三步:A、产酶细菌的培养,B、细菌生长与繁殖,C、生产右旋糖酐蔗糖酶。第二大步为合成右旋糖酐酶,通过采用基因突变技术培育出高产优质细菌,研制一种特殊的培养基配方,使右旋糖酐蔗糖酶产量增加1倍以上,经离心除去细菌后,将酶液定量加于蔗糖缓冲液pH5.2－5.3中于23－26℃温度下,间隙搅拌18－24小时后酒精沉淀即得无菌右旋糖酐,本发明使不控的发酵过程改全新可控过程,不仅使投资和生产成本降低,质量高且产量可增20%以上。

主权项

1、一种酶法生产右旋糖酐，其特征在于：包括以下步骤： 1)右旋糖酐蔗糖酶的生产方法： A、产酶细菌的选育： 将处于生长旺盛期的细菌肠膜状明串球菌细菌离心沉淀、洗涤之后，用浓 度为100微克/毫升的硝酸胍溶液处理90分钟，然后离心沉淀，除去上清液， 再用生理盐水洗涤三次，将这些处理过的细菌接种于斜面培养基上，经过反复 筛选，从中挑出高产优质菌株； B、细菌生长与繁殖： 将上述斜面培养基上的优质细菌接种于500毫升液体培养基中，这种培养 基的组成为： 蔗糖2.0％酵母膏0.5％磷酸氢二钾0.5％ 黄豆抽提物0.3％无机盐液0.5％ 加蒸馏水至100％PH7.3-7.6 所述无机盐液成分为100毫升中含硫酸镁4克，硫酸亚铁、硫酸锰和氯化 钠各0.2克，液体培养基在接种之前必需高压消毒，接种后置于恒温25℃水浴 中培养8至12小时，即可以10倍比例继续接种在新的培养基中，并逐级放大； C、右旋糖酐蔗糖酶的生产： 首先是制备一种适合细菌产酶的特殊培养基，其组成如下： 蔗糖3.0％酵母膏1.0％黄豆抽提物0.3％磷酸氢二钾1.5％ 无机盐液1.0％，加蒸馏水至100％PH7.3-7.8 所述无机盐液组成为：每100毫升中硫酸镁2克，氯化钙0.5克，其他硫酸 亚铁、硫酸锰和氯化钠各0.1克， 上述培养基混匀后高压清毒，冷却至23-25℃备用； 生产时，在无菌条件下，按培养基体积10％比例，将上述生长旺盛期的菌 液接种其中，维持温度在23-25℃左右，并间隙搅动，约24小时，测定PH及 酶活性，当PH下降至4.5-5.0酶活性达高峰时，即可停止反应，放料离心，离 心速度一般为3000-5000转/分，时间约15分钟，离心后将沉淀弃去，上清液 收集在洁净无菌的容器中，加盖后，存放在4℃冷室备用，并测定酶活性，在4 ℃环境中，酶活性一般可稳定达3个月之久。 2)右旋糖酐的酶法合成途径： 取上述方法生产的酶液，按每毫升10个单位计算，加于蔗糖缓冲液中。