| 主权项 |
1.一种衍生自草虾Oka器官的永生细胞株PMO,其寄存 于食品工业发展研究所(FIRDI)之寄存编号为CCRC 960108。2.根据申请专利范围第1项之永生细胞株,其 中该细胞株易受病毒感染并可大量制造病毒。3. 根据申请专利范围第2项之永生细胞株,其中该病 毒为虾病毒。4.根据申请专利范围第2项之永生细 胞株,其中该病毒系选自白斑症候群竿病毒(WSSV)、 草蝉竿病毒(MBV)和感染性内皮组织及造血性坏死 病毒(IHHNV)。5.根据申请专利范围第2项之永生细胞 株,其中该病毒为鱼或贝类病毒。6.根据申请专利 范围第5项之永生细胞株,其中该鱼或贝类病毒为 鱼为感染性胰脏坏死病毒(IPNV)。7.一种生长病毒 的方法,其包含下列步骤: 引进该病毒至包含根据申请专利范围第1项之永生 细胞株的已发展细胞培养物中; 培育该培养物于适合该病毒生长和复制的营养培 养基;及 从该培养物中收集该病毒。8.根据申请专利范围 第7项之生长病毒方法,其中该病毒为虾病毒。9.根 据请专利范围第8项之生长病毒方法,其中该虾病 毒系选自白斑症候群竿病毒(WSSV)、草虾竿病毒(MBV )和感染性内皮组织及造血坏死病毒(IHHNV)。10.根 据申请专利范围第7项之生长病毒方法,其中该病 毒为鱼或贝类病毒。11.根据申请专利范围第10项 之生长病毒方法,其中该鱼或贝类病毒为感染性胰 脏坏死病毒(IPNV)。12.根据申请专利范围第7项之生 长病毒方法,其中该营养培养基包含添加胎牛血清 之L-15培养基。13.根据申请专利范围第7项之生长 病毒方法,其中经由细胞病理效应,在该细胞培养 物中可观察到该病毒。14.根据申请专利范围第7项 之生长病毒方法,其中该收集步骤包含下列步骤: 形成含病毒的细胞匀浆于缓冲液中; 离心该匀浆并收集上清液; 以梯度分层该上清液; 离心该梯度直到等密度情形为止;且 由该等密度梯度中可见病毒环收集该病毒。图式 简单说明: 图1系为PMO细胞经过150传代后之光学显微镜照片, 其显现纤维母细胞及上皮形态。 图2显示血清浓度对PMO细胞生长速率的影响。使用 分别含0%、5%、10%及15%血清,加上NaCl(5克/升)和葡萄 糖(1克/升)的L-15培养基培养PMO细胞。每天计算细 胞数目。 图3显示NaCl浓度对PMO细胞生长的影响。使用分别 含0.5.10或15克/升的NaCl,加上10%胎牛血清和1克/升葡 萄糖的L-15培养基培养PMO细胞。 图4显示温度对PMO细胞生长的影响。使用加上10%血 清的L-15培养基分别在4℃、20℃、28℃、31℃和37℃ 时培养PMO细胞。 图5显示bFGF浓度对PMO细胞生长的影响。使用加上10 %胎牛血清和1克/升葡萄糖及分别为0.5.10或20毫微 克/毫升的bFGF在L-15培养基中培养PMO细胞。 图6显示PMO细胞的染色体形态及染色体数目之分布 。A.为PMO细胞染色体形态。B.为PMO细胞染色体数目 分布柱状图。C.为Oka组织(PMN)的新继代培养细胞之 染色体数目分布柱状图。 图7显示18S rRNA之RT-PCR侦测以确认当作虾细胞之PMO 。左图显示在PMO细胞中发现848 bp RT-PCR产物。右图 显示在草虾的肝(左)及肌肉(右)中发现的848 bp PCR 产物。 图8为PMO细胞与草虾、日本虾和鱼细胞株的相异同 功样态之比较。A为PMO(P)细胞与草虾(Pm)和日本 虾(Pj)之Oka器官的乳酸脱氢(LDW)同功样态。B为 PMO(P)细胞与草虾(Pm)和日本虾(Pj)之Oka器官的苹果 酸脱氢(MDH)同功样态。C为PMO(P)细胞、RTG-2细 胞(R)及CHSE-214细胞(C)和草虾(Pm)及日本虾(Pj)的Oka器 官(O)、心(H)、肺(L)和肠(I)的酯同功样态。 图9显示PMO细胞之形态。发现有六种不同形态的PMO 细胞,其分别呈现不规则形、圆形、扇形、三角形 、方形及纤维母细胞形。 |
