发明名称 METODO DE AMPLIFICACION DE REPETICIONES TERMINALES.
摘要 LA INVENCION SE REFIERE A UN PROCESO PARA AMPLIFICAR UNA SECUENCIA ESPECIFICA DE ACIDO NUCLEICO O SU COMPLEMENTO A UNA TEMPERATURA RELATIVAMENTE CONSTANTE Y SIN ADICION EN SERIE DE REACTIVOS. EL PROCESO REQUIERE AÑADIR A UN MEDIO DE REACCION UNICO UNA ARN POLIMERASA, UNA ADN POLIMERASA, UNA RIBONUCLEASA QUE HIDROLICE EL ARN DE UN HIBRIDO ARN-ADN SIN HIDROLIZAR ARN O ADN DE UNA O DOS HEBRAS, RIBONUCLEOSIDOS Y DESOXIRRIBONUCLEOSIDOS TRIFOSFATOS. EL PROCESO PROPORCIONA UNA PRIMERA PLANTILLA DE ARN EN EL MEDIO DE REACCION. ESTA PRIMERA PLANTILLA DE ARN CONTIENE UNA SECUENCIA COMPLEMENTARIA DE UNA SECUENCIA ESPECIFICA DE ACIDO NUCLEICO, LAS SECUENCIAS INVERTIDAS CORRESPONDIENTES AL PROMOTOR Y EL LUGAR DE INICIACION QUE SON REORGANIZADAS POR LA ARN POLIMERASA, Y UNA SECUENCIA 5 - TERMINAL QUE ES COMPLEMENTARIA DE AL MENOS LA SECUENCIA INVERTIDA DEL LUGAR DE INICIACION. ASI, LA PRIMERA PLANTILLA DE ARN TIENE UNA SECUENCIA REPETIDA INVERTIDA QUE PUEDE PLEGARSE PARA FORMAR UNA ESTRUCTURA DE BUCLE ENEL TERMINAL 5 . LA ADN POLIMERASA UTILIZA LA PRIMERA PLANTILLA DE ARN PARA SINTETIZAR UNA SEGUNDA PLANTILLA DE ADN QUE EN CONJUNTO FORMAN UN HIDRIDO ARN-ADN. LA SEGUNDA PLANTILLA DE ADN CONTIENE UNA SECUENCIA NORMAL DEL PROMOTOR Y DEL LUGAR DE INICIACION. LA RIBONUCLEASA HIDROLIZA EL ARN QUE CONTIENE EL HIBRIDO DE ARN-ADN, PERMITIENDO QUE LA SECUENCIA DE CEBADO EN EL TERMINAL 3 PUEDA HIBRIDARSE CON LA SECUENCIA NORMAL DEL LUGAR DE INICIACION EN LA SEGUNDA PLANTILLA DEL ADN. SEGUIDAMENTE, LA ADN POLIMERASA UTILIZA LA SEGUNDA PLANTILLA DE ADN PARA SINTETIZAR EL PROMOTOR AMPLIANDO LA SECUENCIA DE CEBADO DEL TERMINAL 3 ARCIALMENTE DE DOBLE HEBRA, TIENE UN PROMOTOR ORIENTADO HACIA EL EXTREMO DE LA ESTRUCTURA EN BUCLE. LA ARN POLIMERASA RECONOCE ENTONCES AL PROMOTOR Y TRANSCRIBE LA SEGUNDA PLANTILLA DE ADN, CREANDO ASI COPIAS DE LA PRIMERA PLANTILLA DE ARN. EL PROCESO A PARTIR DE AQUI MANTIENE LAS CONDICIONES DE REACCION DURANTE UN TIEMPO SUFICIENTE PARA CONSEGUIR LA AMPLIFICACION DESEADA DE LASECUENCIA ESPECIFICA DE ACIDO NUCLEICO O SU COMPLEMENTO. ESTA INVENCION INCLUYE UN JUEGO DE REACTIVOS.
申请公布号 ES2168112(T3) 申请公布日期 2002.06.01
申请号 ES19950940256T 申请日期 1995.11.28
申请人 ORGANON TEKNIKA B.V. 发明人 SOOKNANAN, ROY;MALEK, LAWRENCE
分类号 C12N15/09;C12Q1/68;(IPC1-7):C12Q1/68 主分类号 C12N15/09
代理机构 代理人
主权项
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