蛋白质的生产和蛋白质的输送

摘要

本发明涉及含有下述成分的构建体:a)击靶序列;b)调节序列;c)外显子和d)未配对的拼接－供体位点。本发明还涉及体外或体内生产蛋白质的方法,该方法包括在细胞中同源重组上述构建体。然后在允许转录、转译的条件下维持该同源重组体细胞,而导致蛋白质的表达。本发明还涉及同源重组体细胞,包括初级、次级或永久化脊椎动物细胞,制备这些细胞的方法、同源重组以产生融合基因的方法,改变细胞中基因表达的方法,以及采用本发明的构建体于细胞中制造蛋白质的方法。

主权项

1.一种DNA构建体，其在DNA构建体与细胞染色体DNA内的靶位点同源重组时改变细胞内的靶基因的表达，DNA构建体包括：(a)与靶位点同源的导向序列；(b)外源调节序列；(c)外显子；(d)外显子未配对的3’末端的未配对的剪接供体位点；其中，导向序列与靶位点同源重组后，除了靶基因的所有内生外显子外，细胞的染色体DNA还包括构建体-衍生的外显子，其中靶基因编码从下列组中选取的蛋白质，包括γ-干扰素，白细胞介素1，白细胞介素2，白细胞介素3，白细胞介素6，白细胞介素11，白细胞介素12，GSF-粒细胞(G-CSF)，CSF-巨噬细胞(M-CSF)，CSF-粒细胞/巨噬细胞(GM-CSF)，FSHβ，TGF-β，肿瘤坏死因子，胰高血糖素，骨生长因子-2，骨生长因子-7，TSH-β，蛋白激酶C，尿激酶，抗凝血酶III，DNA-se，α-半乳糖苷酶，酪氨酸羟化酶，血液凝血因子V，血液凝血因子VII，血液凝血因子X，血液凝血因子XIII，IL-2拮抗剂和可溶CD4。