一种快速检测CpG胞嘧啶甲基化的方法

摘要

本发明涉及检测DNA胞嘧啶甲基化的方法,包括:1)用亚硫酸氢钠处理部分待测样品DNA;2)根据目标片段处理前两端不含CpG的部位,设计2对引物,对处理前、后DNA进行PCR扩增;3)在未甲基化目标片段的tPCR产物的变性(解链)温度下测定样品tPCR产物的色谱保留时间;4)将tPCR产物保留时间明显延长样品目标片段的wPCR产物与野生型对照样品等量混合,进行变性和复性杂交处理,测定样品目标片段是否存在点突变。该方法能反映整个目标片段中CpG的胞嘧啶甲基化状态,简易、快速、成本低廉、准确。

主权项

1.一种检测CpG胞嘧啶甲基化的方法，包括下列步骤：1〕用亚硫酸氢钠处理部分待测样品DNA；2〕根据目标片段处理前两端不含CpG的部位，分别设计2对引物，1对能够与处理前的目标片段配对，进行处理前目标片段的PCR扩增(wPCR)；另外1对引物能够与处理后的目标片段配对，进行处理后目标片段的PCR扩增(tPCR)；3〕用DHPLC在未甲基化目标片段的tPCR产物的部分变性(解链)温度下测定样品tPCR产物的色谱保留时间；4〕将tPCR产物保留时间明显延长样品目标片段的wPCR产物与野生型对照样品等量混合，进行变性和复性杂交处理，用DHPLC在wPCR产物的部分变性(解链)温度下测定样品目标片段是否存在点突变。