新的工程化大肠杆菌G830

摘要

本发明公开了一种适用于高密度发酵的微生物,在所述微生物的染色体上整合有外源的透明颤菌血红蛋白基因,而且该微生物乙酸代谢的主要途径被阻断。新的工程菌G830不仅可消除乙酸的不利积累,而且对氧的利用能力大为提高,因而更适合在高密度发酵条件下表达外源蛋白。本发明还公开了产生在基因组中整合外源基因(如透明颤菌血红蛋白基因)的新方法。

主权项

1.一种产生基因组整合有外源基因的微生物方法，其特征在于，它包括步骤：(a)提供一整合型重组质粒，该质粒含(i)温度敏感型复制子，该复制子在复制温度下复制而在抑制温度下复制受抑制；(ii)所述微生物的染色体基因同源片段A和同源片段B；(iii)待整合的外源基因；以及(iv)2种或多种抗性筛选标记基因；(b)用所述的整合型质粒转化宿主细胞，在抑制温度下筛选出能生长的共整合体；(c)在复制温度下培养步骤(b)中筛选出的共整合体，使共整合体解离；(d)筛选出在复制温度下生长且在抑制温度下生长被抑制的拆分体；(e)在抑制温度下连续培养拆分体，使重组质粒丢失，从而产生基因组整合有外源基因的微生物。