肝靶向重组P<SUP>EGFP－ATK</SUP>质粒纳米粒制剂

摘要

本发明为肝靶向重组p^EGFP－ATK质粒纳米粒制剂,以质粒p^UC－AFPlb,p^EGFP和p^NGVL－TK为原料,先用常规法大抽三种质粒,然后分别用限制性内切酶HindIII和EcoRI消化p^UC－AFPlb分离纯化得AFP—Alb增强子—启动子片段,用限制性内切酶HindIII—SmaI消化p^NGVL－TK,分离纯化得TK片段,用限制性内切酶HindIII—SmaI消化真核表达载体p^EGFP,分离纯化得线性化载体片段,然后将该消化载体片段与AFP—Alb启动子片段进行5′端定向连接,酚抽提,乙醇沉淀后再用此连接产物与HindIII—SmaI消化TK片段进行3′端定向连接,再次酚抽提,纯化,然后用绿豆芽核酸酶MB处理5′突出端后,再进行平端连接,得重组质粒,将聚酯载体,吐温80用有机溶剂溶解,加入重组质粒,匀化后加入聚乙烯醇溶液,再次匀化,所得产物搅拌后冷冻干燥得本发明。

主权项

1.一种肝靶向重组pEGFP-ATK质粒纳米粒制剂，其特征在于以质粒pUC-AFPlb，pEGFP和PNGVL-TK为原料，先用常规法大抽三种质粒，然后分别用限制性内切酶HindIII和EcoRI消化PUC-AFPlb分离纯化得800bp的AFP-Alb增强子-启动子片段，用限制性内切酶HindIII-SmaI消化PNGVL-TK，分离纯化得1125bp的TK片段，用限制性内切酶HindIII-SmaI消化真核表达载体pEGFP，分离纯化得线性化载体片段，然后将该消化载体片段与AFP-Alb启动子片段进行5′端定向连接，酚抽提，乙醇沉淀后再用此连接产物与HindIII-SmaI消化TK片段进行3′端定向连接，再次酚抽提，纯化，然后用绿豆芽核酸酶MB处理5′突出端后，再进行平端连接，得重组质粒，将聚酯载体，吐温80用有机溶剂溶解，再加入上述重组质粒，匀化后加入聚乙烯醇溶液，再次匀化，所得产物搅拌后冷冻干燥而制成。