一种人白细胞介素－18亚型(53A rgIL－18)的基因克隆、产物的制备及应用

摘要

本发明涉及一种重组人白细胞介素－18(⁵³Arg IL－18)的制备方法。PCR扩增的人⁵³Arg IL－18cDNA片段与原核表达载体如pBV220组装成高效表达质粒pIL－18,转化大肠杆菌后用温度诱导IL－18基因表达,表达量达菌体总蛋白量的30－40%。工程菌经发酵扩增,破碎后提取包涵体,包涵体经纯化后用尿素溶解变性并采用凝胶排阻层析和阴离子交换层析二步法纯化产品,两步之间进行分子复性,加保护剂后制成药用冻干制剂。该制剂可治疗癌症等病症。

主权项

1、一种重组人白细胞介素-18亚型(53Arg IL-18)的制备方法，包括PCR引物设计、扩增的基因、表达质粒的构建、表达产物的纯化工艺，其特性在于：(1)采用自行设计的PCR引物，自中国人外周血单个核细胞中克隆出53ArgIL-18的cDNA片段；(2)上述IL-18 cDNA与含有PL、PR启动子的原核表达载体pBV220组装成高效表达质粒pIL-18；(3)plL-18转化大肠杆菌，用温度诱导IL-18基因的表达，产物以包涵体形式存在工程菌内；(4)通过发酵技术扩增工程菌，用2YT作基础培养基，在表达不同时机加氮源、碳源等营养素；(5)发酵后破碎菌体，纯化包涵体并用尿素溶解变性，随后采用凝胶排阻层析和阴离子交换层析二步法纯化产品，两步之间进行分子复性。