发明名称 抗鸭瘟及鸭病毒性肝炎的异源动物高免血清的制备方法
摘要 本发明公开了一种抗鸭瘟及鸭病毒性肝炎的异源动物高免血清的制备方法,包括鸭瘟种毒的制取,鸭病毒性肝炎种毒的制取,一免抗原的制取,二免抗原的制取、异源动物血清的制取,用该方法制成的高免血清对预防和治疗鸭瘟和鸭病毒性肝炎具有显著疗效,其预防率为95%,治愈率87%。$#!
申请公布号 CN1072508C 申请公布日期 2001.10.10
申请号 CN95112185.5 申请日期 1995.10.30
申请人 鹿忠孝 发明人 鹿忠孝;郝金法;张绍谦
分类号 A61K39/42 主分类号 A61K39/42
代理机构 山东省专利事务所 代理人 马耀文
主权项 1、一种抗鸭瘟及鸭病毒性肝炎的异源动物高免血清的制备方法,包括鸭瘟种毒的制取、鸭病毒性肝炎种毒的制取、一免抗原的制取、二免抗原的制取、异源动物血清的制取,其特征在于:a、鸭瘟种毒的制取:(1)在无菌条件下取因患鸭瘟病死亡的鸭内脏,放入组织捣碎机中捣碎; (2)按总重量为100计算,取占总量为10-20%的被捣碎的鸭组织与占总重量为80-90%的浓度为0.8%的生理盐水混合,形成混合组织悬液;(3)将混合组织悬液放入离心机中,在4000转/分条件下离心20-40分钟后取其上清液;(4)在其上清液中,按每毫升上清液各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素的配比加入青霉素和链霉素后即形成鸭瘟种毒,并将其放入冰箱中在-4℃条件下储藏备用;b、鸭病毒性肝炎种毒的制取:在无菌条件下取因鸭病毒性肝炎死亡的鸭内脏,采取与a所述方法完全相同的方法即获鸭病毒性肝炎种毒,并将取放入冰箱中的-4℃条件下储藏备用;c、一免抗原的制取;(1)将a中所述方法制取的鸭瘟种毒,放入浓度为0.8%的生理盐水中稀释100倍,形成鸭瘟种毒稀释液,用0.1毫升剂量的鸭瘟种毒稀释液接种于9-12日龄的鸭胚尿囊中,接种后选取在48-120小时之间具有出血、水肿等特征死亡的鸭胚,取其尿囊液,在每毫升尿囊液中各加入2000单位的青霉素和2000单位的链霉素后即形成为一免鸭瘟抗原,并将其放入冰箱中在-4℃条件下储藏备用;(2)将a中所述方法制取的鸭病毒性肝炎种毒放入浓度为0.8%的生理盐水中稀释100倍,形成鸭病毒性肝炎种毒稀释液,用0.1毫升剂量的鸭病毒性肝炎种毒稀释液接种于9-12日龄的鸭胚尿囊中,接种后选取在48-120小时之间具有出血、水肿等特征死亡的鸭胚,取其尿囊液,在其每毫升尿囊液中加入2000单位的青霉素和2000单位的链霉素后即形成为一免鸭病毒性肝炎抗原,并将其放入冰箱中在-4℃条件下储藏备用;d、二免抗原的制取:取一免抗原的制取方法中经接种鸭瘟种毒后死亡的鸭胚体放入组织捣碎机中捣碎,按总重量为100计算,取占总重量为10-20%的被捣碎的鸭胚体组织与占总重量为80-90%的浓度为0.8%的生理盐水混合,形成混合组织悬液,将混合组织悬液放入离心机中,在4000转/分条件下离心20-40分钟后取其上清液,在其上清液中按每毫升上清液各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素的配比加入青霉素和链霉素,并按总重量的0.4%的配比加入福尔马林液做成灭活菌,即成为二免鸭瘟抗原,并在室温下保存备用。采取一免抗原的制取方法中经接种鸭病毒性肝炎种毒死亡的鸭胚体用同样的办法可获得二免鸭病毒性肝炎抗原,并在室温下保存备用;e、异源动物血清的制取:异源动物二联高免血清的制取选健康无病的异源动物如马、牛、猪、羊、兔等,按所选异源动物体重每10公斤在其颈部、腹部两侧5-10点皮下注射一免鸭瘟抗原和一免鸭病毒性肝炎抗原各1毫升,7天后进行二免,即对一免后的异源动物,按其体重每10公斤在其皮下5-10点各注射1毫升二免鸭瘟抗原和1毫升二免鸭病毒性肝炎抗原,再经7天后进行三免,即对二免后的异源动物,按其体重每10公斤在颈、腹部5-10点注射3.5毫升一免鸭瘟抗原和3.5毫升一免鸭病毒性肝炎抗原。三免注射后每隔5天采血一次,进行抗体效价检测,30天后当抗体效价在1∶16-1∶128范围时,对该异源动物在无菌条件下进行采血,将被采集的血放入无菌容器中进行自然分离后吸取其血清,在其血清中按每毫升血清加入2000单位青霉素和2000单位链霉素后,再按其总重量的1/10000量加入硫柳汞后即成为二联高免血清,对其高免血清分装、封口,并置于-18℃条件下保存。
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