| 主权项 |
1.一种纯化红血球生成素的肝素色层分离法,其组成步骤为:a)将含红血球生成素的生物液与肝素色层分离支持物接触,因此该红血球生成素结合至该肝素色层分离支持物;b)以冲提缓冲液冲提该红血球生成素;和c)收集该红血球生成素。2.一种在纯化红血球生成素之方法中作为第一个步骤之色层分离法,包含:a)在某一反应条件下,将含红血球生成素的生物液与肝素亲和性支持物接触,因此该红血球生成素分子结合至该肝素亲和性支持物;b)以冲提缓冲液冲提该红血球生成素分子;和c)收集该红血球生成素。3.如申请专利范围第1项之色层分离法,可被包括在红血球生成素之纯化的多步骤程序中的任一点,其系包含:a)将含红血球生成素的生物液与肝素亲和性支持物接触,在此条件下,该红血球生成素分子结合至该肝素亲和性支持物;b)以冲提缓冲液冲提该红血球生成素分子;和c)收集该红血球生成素。4.如申请专利范围第1项之色层分离法,可用以由红血球生成素中去除蛋白质污染物,其系包含:a)将含红血球生成素的生物液与肝素亲和性支持物接触,在此条件下,该红血球生成素分子结合至该肝素亲和性支持物;b)以冲提缓冲液冲提该红血球生成素分子;和c)收集该红血球生成素。5.如申请专利范围第4项的色层分离法,其中由红血球生成素中所去除的蛋白质污染物是血清蛋白质。6.如申请专利范围第4或5项的色层分离法,其中该蛋质污染物是选自于下列族群:小牛血清、牛血清、胎牛血清、血清白蛋白和输铁蛋白。7.如申请专利范围第3项的色层分离法,其可被包括在红血球生成素之纯化的多步骤程序中的任一点,其中该多步骤程序包含一或多个选自下列族群的色层分离步骤:离子交换,忌水性交互作用,尺寸大小排除,逆相或亲和性色层分离法。8.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其中该生物液与该肝素亲和性支持物接触之前,该生物液需先经过过滤作用。9.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其中该生物液与该肝素亲和性支持物接触之前,该生物液需先经过超过滤作用。10.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其中该生物液与该肝素亲和性支持物接触之前,该生物液需先经过离心作用。11.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其中该生物液与该肝素亲和性支持物接触之前,该生物液需先经过透析作用。12.如申请专利范围第9项的色层分离法,其中该材料系利用5,000-100,000D阻断膜进行超过滤作用。13.如申请专利范围第9项的色层分离法,其中该澄清材料系利用10,000 - 30,000D阻断膜进行超过滤作用。14.如申请专利范围第8项的色层分离法,其中该材料系利用0.45膜进行过滤作用。15.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其系进一步包含该红血球生成素分子的结合,发生在pH5-8之间。16.如申请专利范围第15项的色层分离法,其系进一步包含该红血球生成素分子的结合,发生在pH6.2。17.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其系进一步包含在该生物液与该肝素亲和性支持物接触之前,该生物液需先经过澄清作用。18.如申请专利范围第17项的色层分离法,其系进一步将该生物液利用离心法进行澄清。19.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其系进一步包含该红血球生成素分子的结合发生在平衡缓冲液。20.如申请专利范围第1至4或19项中任一项的色层分离法,其系进一步包含该红血球生成素分子的结合,发生在三(羟甲基)-胺甲烷缓冲液。21.如申请专利范围第1至4或19项中任一项的色层分离法,其系进一步包含该红血球生成素分子的结合,发生在2-(N-吗)-乙烷磺酸缓冲液。22.如申请专利范围第1至4或19项中任一项的色层分离法,其系进一步包含该红血球生成素分子的结合,发生在磷酸盐缓冲液。23.如申请专利范围第1至4或19至22项中任一项的色层分离法,其中该红血球生成素分子的结合发生在pH4.9-8.0。24.如申请专利范围第23项的色层分离法,其中该红血球生成素分子的结合发生在pH5.9-7.5。25.如申请专利范围第24项的色层分离法,其中该红血球生成素分子的结合发生在pH0.2。26.如申请专利范围第24项的色层分离法,其中该红血球生成素分子的结合发生在pH7.0。27.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其系进一步包含利用改变冲提缓冲液以冲提该红血球生成素。28.如申请专利范围第27项的色层分离法,其系进一步包含利用增加缓冲液内盐类浓度以冲提该红血球生成素。29.如申请专利范围第27项的色层分离法,其系进一步包含利用外加的盐类和/或缓冲液清洗管柱以冲提该红血球生成素。30.如申请专利范围第27项的色层分离法,其系进一步包含利用改变冲提缓冲液的pH値以冲提该红血球生成素。31.如申请专利范围第19至27项的色层分离法,其中该缓冲液额外含有抗附着物。32.如申请专利范围第31项的色层分离法,其中该缓冲液额外含有Tween。33.如申请专利范围第27项的色层分离法,其系进一步包含利用增加硷金族卤化物盐类浓度以冲提该红血球生成素。34.如申请专利范围第33项的色层分离法,其中该硷金族卤化物是氯化钠(NaCl)35.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其中该生物液是培养液。36.如申请专利范围第35项的色层分离法,其中该培养液经过澄清作用。37.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其中含有红血球生成素的生物液或收集的液体需经过缓冲液交换作用。38.如申请专利范围第37项的色层分离法,其中该缓冲液交换方法系选自于正切流动系统,空心纤维,螺旋缠绕过滤器,搅拌的细胞系统,透析,透析过滤,过滤步骤或传统色层分离法。39.如申请专利范围第38项的色层分离法,其中该缓冲液交换作用系利用选择5,000-10,000或10,000-30,000分子量膜进行透析或透析过滤。40.如申请专利范围第37项的色层分离法,其中该缓冲液交换作用在pH6-8中进行。41.如申请专利范围第40项的色层分离法,其中该缓冲液交换作用在pH5.9-7.5中进行。42.如申请专利范围第41项的色层分离法,其中该缓冲液交换作用在pH6.2-7.0中进行。43.如申请专利范围第37项的色层分离法,其中该缓冲液交换进行的缓冲液盐类浓度为0-200mM。44.如申请专利范围第43项的色层分离法,其中该缓冲液交换进行的缓冲液盐类浓度为0-10mM。45.如申请专利范围第1至4项中任一项的色层分离法,其中该肝素亲和性支持物是来自商业可获得的来源。46.如申请专利范围第45项的色层分离法,其中该肝素亲和性支持物系选自下列族群:Heparin Sepharose CL-6 B, HeparinSepharose 6 Fast Flow, HiTvap Heparin, Affigen Heparin,Heparin Agarose, Heparin Sepharose, Heparin Hyper D,和Heparin Agarose 6XL。图式简单说明:第一图:源自于4%血清的GA-EPO的Heparin-Sepharose色层分离法。第二图:源自于2%血清的GA-EPO的Heparin-Sepharose色层分离法。第三图:源自于不含血清培养基的GA-EPO的Heparin-Sepharose色层分离法。第四图:源自于4%血清的GA-EPO的Heparin-Sepharose6快速流动色层分离法。第五图:源自于2%血清的GA-EPO经过离子交换法和忌水性交互作用色层分离法起始纯化过程的HiTrapHeparin色层分离法。第六图:源自于2%血清的GA-EPO经过忌水性交互作用色层分离法起始纯化过程的HiTrap Heparin色层分离法。第七图:源自于CHO细胞的红血球生成素的HiTrapHeparin色层分离法。第八图:第1表,肝素色层分离法之纯化过程表。 |
