一种高分辨率单碱基突变检测的杂交方法及其应用

摘要

一种寡核苷酸杂交方法,探针长度相同,以玻璃等无机载体为固定载体。使用烷基季铵盐氯化四甲铵(TMACL)杂交体系,杂交液为按终浓度0.01MPH6.8磷酸钠、1mMPH7.6EDTA、0.5%SDS、100μg/ml鱼精DNA、5×Denhardt溶液,0.5－1.5MTMACL,洗涤液配方按终浓度0.2%SDS,50mMPH8.0Tris－HCl,TMACL浓度与杂交液中相同,杂交温度低于Ti值5－10℃,洗涤温度低于杂交温度5－10℃。本发明提供的杂交方法适用于相同长度,不同G+C或A+T含量的寡核苷酸芯片,具有芯片设计简单,单碱基分辨清晰的优点。

主权项

1.一种寡核苷酸杂交方法，使用烷基季铵盐氯化四甲铵(TMACL)杂交体系，包括：(1)寡核苷酸探针的设计，准备；(2)目的片断与杂交液混合；(3)杂交；(4)洗涤，凉干；(5)信号分析；其特征在于杂交液为按终浓度0.01MPH6.8磷酸钠、1mMPH7.6EDTA、0.5％SDS、100μg/ml鱼精DNA、5×Denhardt溶液，0.5-1.5MTMACL。