一种缺失型人α珠蛋白基因的PCR检测方法

摘要

本发明提供一种缺失型人α珠蛋白基因的PCR检测方法,本发明采用4个(2对)引物P1、P2、P7、P4组成2对PCR反应,分别针对正常等位基因和缺失等位基因(－SEA/基因),提供了引物的设计方案和结果的解释。根据本发明的新方案所建立的检测－SEA缺失基因的方法,经实验证实可在同一试管内同时实现2对特异性PCR引物的扩增,且有很好的重复性。本方法除提供－SEA缺失基因检测信息外,还能一次检测提供多种有价值的特定α珠蛋白基因缺失的信息。

主权项

1．一种缺失型人α珠蛋白基因的PCR检测方法，包括对人基因DNA待测样品的PCR扩增和对经PCR扩增后的产物进行电泳分析，其特征在于采用4个(2对)引物P1、P2、P7、P4组成2对PCR反应，该PCR体系的引物设计方案为：(1)引物P1和P2组成一对扩增—SEA/基因的引物，这2个引物分别位于该缺失基因5’断裂点的上游和3’断裂点的下游；引物P7、P4组成一对扩增正常等位基因的引物，这2个引物的结合点均位于中国人常见的α地贫基因缺失区内，即引物所在区域是—SEA/、-α3.7/和-α4.2/这三种基因的共同缺失点；(2)在每条引物的特异性基因序列的5’端连上一段由20个核昔酸组成的与人类基因不同源的高GC含量的序列，该20个核苷酸长度的寡核苷酸与特异性引物序列直接(不间隔)连接，其合成方式与普通引物相同，这样，构成此2重PCR体系的4个这种加长的寡核苷酸引物的5’端均含有一个共同尾序列。